Chương 2: CÔNG CỤ CHUYỂN GEN: PLASMID VÀ BACTERIOPHAGE Một phân tử DNA cần phải bộc lộ 1 vài đặc trưng tiêu biểu để có thể dùng như 1 công cụ để tạo dòng gen (gene cloning). Quan trọng nhất là chúng phải có khả năng tái bản trong tế bào chủ (host cell), tạo được 1 số lượng lớn các bản sao (copies ) của phân tử DNA tái tổ hợp (recombinant DNA molecule) và truyền được qua các tế bào con (daughter cells) . Một công cụ tạo dòng còn đòi hỏi phải có kích thước khá nhỏ, lý. | Chương 2 CÔNG cụ chuyển GEN plasmid và BACTERIOPHAGE Một phân tử DNA cần phải bộc lộ 1 vài đặc trưng tiêu biểu để có thể dùng như 1 công cụ để tạo dòng gen gene cloning . Quan trọng nhất là chúng phải có khả năng tái bản trong tế bào chủ host cell tạo được 1 số lượng lớn các bản sao copies của phân tử DNA tái tổ hợp recombinant DNA molecule và truyền được qua các tế bào con daughter cells . Một công cụ tạo dòng còn đòi hỏi phải có kích thước khá nhỏ lý tưởng nhất là nhỏ hơn 10 kb. Bởi vì những phân tử lớn sẽ dễ bị gãy vỡ trong quá trình tinh sạch và khó khăn hơn khi thao tác. Hai lọai phân tử DNA thỏa mãn được các tiêu chuẩn trên đã được tìm thấy trong tế bào vi khuẩn đó là plasmid và nhiễm sắc thể của bacteriophage. Mặc dù plasmids thường được dùng để làm công cụ tạo dòng cloning vehicles nhưng 2 trong số những lọai vector quan trọng nhất được sử dụng ngày nay lại bắt nguồn từ thực khuẩn thể bacteriophage . PLaSmiDS Đặc trưng cơ bản của plasmids Plasmids là những phân tử DNA dạng vòng tồn tại độc lập trong tế bào vi khuẩn hình .Plasmids hầu hết luôn mang 1 hoặc nhiều gen và thường thì các gen này đảm nhiệm các đặc tính hữu ích được bộc lộ trong tế bào vi khuẩn chủ. Ví dụ như khả năng sống sót được ở môi trường có kháng sinh chloramphenicol hay ampicillin thường phụ thuộc vào sự hiện diện của plasmid có mang gen kháng kháng sinh chứa trong vi khuẩn đó. Trong phòng thí nghiệm thì những gen kháng kháng sinh này thường được dùng như 1 phân tử đánh dấu selectable marker để đảm bảo vi khuẩn trong môi trường nuôi cấy có chứa 1 plasmid cụ thể nào đó. hình _ Hình sử dụng gen kháng kháng sinh để làm marker chọn lọc cho plasmids RF4 - RF4 có chứa gen kháng ampicilin kanamycin tetrcycline - Cho hỗn hợp có chứa RF4 và ko chứa RF4 vào môi trường ko có kháng sinh thì tất cả đều sống - Cho hỗn hợp có chứa RF4 và ko chứa RF4 vào môi trường có 50pm ml tetracyline thì tất cả chỉ những plasmid có .
