Chương 8 CHƯƠNG 8: PHƯƠNG PHÁP THU NHẬN CLONE TỪ GENE ÐẶC TRƯNG Vấn đề được quan tâm hiện nay là làm cách nào để tạo phân tử DNA tái tổ hợp và chuyển chúng vào tế bào sống trong thực tiễn nhằm tạo các gen clone chuyên biệt và cung cấp thông tin quan trọng đối với SHPT và CNSH Kiểm tra thử nghiệm gene cloning – thông qua các kỹ thuật có thể chọn lọc trực tiếp những clone mang gene mong muốn hoặc phân biệt chúng với những thể tái tổ hợp khác mà quyết định sự thành công. | Chương 8 CHƯƠNG 8 PHƯƠNG PHÁP THU NHẬN CLONE TỪ GENE ĐẶC TRƯNG Vấn đề được quan tâm hiện nay là làm cách nào để tạo phân tử DNA tái tổ hợp và chuyển chúng vào tế bào sống trong thực tiễn nhằm tạo các gen clone chuyên biệt và cung cấp thông tin quan trọng đối với SHPT và CNSH. Kiểm tra thử nghiệm gene cloning - thông qua các kỹ thuật có thể chọn lọc trực tiếp những clone mang gene mong muốn hoặc phân biệt chúng với những thể tái tổ hợp khác mà quyết định sự thành công hay thất bại. VẤN ĐỀ CHỌN LỌC Ngay cả những vi sinh vật đơn giản nhất như cũng chứa đến hàng ngàn gen và việc phân cắt giới hạn tổng số DNA tế bào tạo ra không chỉ những đoạn mang gen mong muốn mà còn tạo ra các đoạn chứa các gen còn lại. Trong suốt phản ứng gắn kết sẽ tạo ra nhiều phân tử DNA tái tổ hợp khác nhau do không có chọn lọc đối với từng đoạn rieng rẻ . Do đó mà có nhiều clone tái tổ hợp được tạo ra sau quá trình biến nạp và plating out trải trên đĩa . Bằng cách nào đó mà xác định clone mong muốn. Hình Vấn đề chọn lọc a. Cắt phân tử DNA bằng enzyme cắt giới hạn EcoRI rồi chuyển vào vector. b. Kết quả tạo phân tử DNA tái tổ hợp. c. Tất cả đều tạo khuẩn lạc làm thế nào xác định clone mong muốn. Hai kỹ thuật cơ bản để tạo clone mong muốn Chọn lọc trực tiếp từ gen mong muốn chỉ những clone từ các gen mong muốn là được tạo ra. Hầu như sự chọn lọc được tiến hành trên đĩa. Xác định clone từ gen library đòi hỏi thử nghiệm shotgun cloning ban đầu để tạo clone library chứa hầu hết hoặc tất cả các gen có trong tế bào sau đó phân tích từng clone riêng rẻ để xác định clone mong muốn. Hình Hai kỹ thuật cơ bản xác định clone chuyên biệt a. Chọn lọc trực tiếp chỉ thể tái tổ hợp mong muốn mới có thể sống sót. b. Xác định thể tái tổ hợp mong nuốn từ một clone library 1 Chương 8 Trong các trường hợp tổng quát thường sử dụng phương pháp chọn lọc trực tiếp do nhanh rõ ràng nhưng không phải thích hợp cho tất cả các gen. Vì thế kỹ thuật xác định clone là rất .
