. Lugol Indine Potassium iodone Nước cất . Fuchin kiềm Fuchin kiềm Phenol Nước cất Lắc đều lọc qua giấy 3. CÁC PHƯƠNG PHÁP THỰC HIỆN . Phương pháp kiểm tra hoạt tính amylase (Phương pháp Wolhgemuth) Phương pháp này xác định lượng enzyme ít nhất có thể phân giải hoàn toàn lượng tinh bột với chất chỉ thị màu iodine. Một đơn vị Wolhgemuth là lượng enzyme ít nhất mà sau 30 phút ở 30oC, khi có ion clorine có thể phân giải 1 mg tinh bột đến các sản phẩm không tạo màu với iodine. Hoạt tính của. | . Lugol Indine 1 g Potassium iodone 2 g Nước cat 300 ml . Fuchin kiềm Fuchin kiềm 10 ml dung dịch bão hòa trong rượu etylic 95 Phenol Nước cat 5 ml 100 ml Lắc đều lọc qua giấy 3. CÁC PHƯƠNG PHÁP THỰC HIỆN . Phương pháp kiểm tra hoạt tính amylase Phương pháp Wolhgemuth Phương pháp này xác định lượng enzyme ít nhất có thể phân giải hoàn toàn lượng tinh bột với chất chỉ thị màu iodine. Một đơn vị Wolhgemuth là lượng enzyme ít nhất mà sau 30 phút ở 30oC khi có ion clorine có thể phân giải 1 mg tinh bột đến các sản phẩm không tạo màu với iodine. Hoạt tính của enzyme được biểu diễn bằng số đơn vị Wolhgemuth trên 1 ml dịch môi trường hoặc 1 ml dung dịch chiết enzyme. . Thiết bị vật liệu và hóa chất J Bình tam giác hay bình cầu J Ống nghiệm J Máy ly tâm hay máy lọc J Pipet tự động J Dung dịch enzyme Nghiền cẩn thận môi trường thạch có chứa vi sinh vật cân 20 - 100 g cho vào bình tam giác hay bình cầu thêm 500 - 1000 ml dung dịch NaCl 1 lắc liên tục từ 1 - 2 giờ trên máy lắc ở nhiệt độ phòng. Lọc hoặc ly tâm để thu được dịch chiết trong suốt. Nếu môi trường nuôi cấy là dịch thể chỉ cần ly tâm tách sinh khối rồi sử dụng phần chất lỏng trong suốt thu được để phân tích. S Dung dịch tinh bột 0 1 S Dung dịch NaCl 0 1 S Dung dịch iod 0 02 . Cách tiến hành Chuẩn bị 10 ống nghiệm cho vào mỗi ống 1ml dung dịch NaCl 0 1 . Thêm vào ống thứ nhất 1ml enzyme rồi lắc đều lấy 1 ml chuyển sang ống thứ hai lại lắc đều và lấy 1ml chuyển sang ống thứ ba. Cứ thế cho đến ống thứ 10 sau cùng lấy 1ml ở ống thứ 10 bỏ đi. Cho vào mỗi ống 2ml dung dịch tinh bột 0 1 lắc đều giữ ở 30oC trong 30 phút. Làm lạnh cho vào một giọt dung dịch iodine 0 02 N. Ghi nhận ống có độ pha loãng lớn nhất mà không tạo màu với iodine. Ví dụ Các ống từ 1 đến 4 không tạo màu nhưng ống thứ 5 trở đi có màu thì hoạt tính của enzyme trong 1ml dung dịch enzyme là 16 X 2 32 đơ n vị. Trong đó 16 là độ pha loãng của dung dịch enzyme trong ống thứ 4 2 là số mg tinh bột trong mỗi ống nghiệm. . Phương pháp kiểm
