17 . Phản ứng kết tủa khuếch tán kép trên thạch (Double diffusion in two dimensions) (Kỹ thuật Ouchterlony) [6] Phương pháp thường được sử dụng để đánh giá tính đặc hiệu của kháng thể đối với kháng nguyên là phản ứng kết tủa khuếch tán kép trên thạch (kỹ thuật Ouchterlony). Kỹ thuật này dựa trên sự hình thành cấu trúc mạng lưới của agarose. Các phân tử có trọng lượng nhỏ hơn 200 kDa khuếch tán dễ dàng trong agarose, các phân tử có trọng lượng lớn di chuyển chậm và khó khăn hơn . | 17 . Phản ứng kết tủa khuếch tán kép trên thạch Double diffusion in two dimensions Kỹ thuật Ouchterlony 6 Phương pháp thường được sử dụng để đánh giá tính đặc hiệu của kháng thể đối với kháng nguyên là phản ứng kết tủa khuếch tán kép trên thạch kỹ thuật Ouchterlony . Kỹ thuật này dựa trên sự hình thành cấu trúc mạng lưới của agarose. Các phân tử có trọng lượng nhỏ hơn 200 kDa khuếch tán dễ dàng trong agarose các phân tử có trọng lượng lớn di chuyển chậm và khó khăn hơn. Kháng nguyên và kháng thể sau khi được phủ đầy vào các giếng sẽ khuếch tán toả tròn xung quanh các giếng và hình thành građien nồng độ. Khi nồng độ kháng nguyên và kháng thể tương ứng nhau một đường hoặc cung kết tủa xuất hiện. Thông thường đường kết tủa được tạo thành ở tỉ lệ kháng thể - kháng nguyên là 4 1. Đường kết tủa được tạo thành giữa kháng nguyên và kháng thể hoạt động như một hàng rào miễn dịch đặc hiệu ngăn chặn sự tiếp tục khuếch tán của các cặp kháng nguyên - kháng thể nhưng không cản trở sự khuếch tán của từng phân tử kháng nguyên kháng thể. Khi nhận định kết quả căn cứ vào đường kết tủa có thể có 3 trường hợp xảy ra - Các giếng chứa kháng nguyên đều đồng nhất và tương ứng với kháng thể thì các đường kết tủa gặp nhau và nối liền nhau. Đây là hiện tượng hai kháng nguyên đồng nhất Hình . - Nếu hai giếng chứa kháng nguyên chỉ có một phần tương ứng với một phần khác nhau của kháng thể thì sẽ xuất hiện hai đường kết tủa cắt nhau tức hai kháng nguyên không có liên quan với nhau. Đây là hiện tượng hai kháng nguyên không đồng nhất nhau Hình . - Nếu hai giếng chứa kháng nguyên có liên quan một phần với kháng thể cùng có chung một nhóm quyết định A sẽ tạo ra hai đường kết tủa gặp nhau nhưng là một đường dài và một đường ngắn hơn Hình . 18 Hình Hiện tượng hai kháng nguyên đồng nhất A không đồng nhất B đồng nhất một phần C được phát hiện bằng phản ứng kết tủa khuếch tán kép trên thạch Nguồn Terrance The tools of biochemistry John Wiley Sons New York 1977 . PHẢN
