Primer (F và R). Agarose. Loading dye 6X (thuốc nhuộm). Thang chuẩn (ladder) 1000 bp (BioRad). TAE 1X. Nước không chứa nuclease (Nuclease free water). Phƣơng pháp thực hiện Ly trích RNA Bước 1: Cân khoảng 60 mg mẫu đã qua chẩn đoán ELISA cho kết quả dương tính, cắt nhỏ mẫu ( | 41 - Primer F và R . - Agarose. - Loading dye 6X thuốc nhuộm . - Thang chuẩn ladder 1000 bp BioRad . - TAE 1X. - Nước không chứa nuclease Nuclease free water . Phương pháp thực hiện Ly trích RNA - Bước 1 Cân khoảng 60 mg mẫu đã qua chẩn đoán ELISA cho kết quả dương tính cắt nhỏ mẫu 5 mm . Cho mẫu vào cối đã qua xử lý với NaOH EDTA rửa bằng nước cất bọc giấy bạc đem hấp khử trùng ở 121 oC trong 20 phút sấy khô 1 ngày đêm nghiền mẫu thành bột mịn với nitơ lỏng. - Bước 2 Cho 60 mg mẫu đã nghiền vào tube ly tâm 2 ml có nắp đậy không có RNase . Hòa tan mẫu bằng dung dịch ly giải lysis solution bổ sung PVP 2 gồm 14 pl PVP 2 700 Lil dung dịch ly giải cho mỗi mẫu . - Bước 3 Thêm 700 pl dung dịch ly giải đã được trộn ở trên vào tube 2 ml chứa mẫu trộn mẫu bằng pipet khoảng 10 lần hút lên xuống để phá vỡ mẫu . - Bước 4 Ly tâm 13000 vòng trong 3 phút chuyển toàn bộ dịch nổi vào tube ly tâm 2 ml mới có nắp đậy. - Bước 5 Thêm 700 Lil ethanol 70 hòa tan bằng pipet cho đến khi dịch không còn phân lớp. - Bước 6 Ủ ấm dung dịch hòa tan elution solution trong bồn ủ water bath ở 70oC chuẩn bị cho bước 15 . Đặt RNA binding column RNA bc vào tube 2 ml không nắp. - Bước 7 Cho 700 pl dung dịch ở bước 5 vào RNAbc ly tâm 12000 vòng trong 60 giây ở 4oC loại bỏ dịch lọc trong ống rửa và đặt RNAbc trở lại. Cho dịch còn lại vào cột ly tâm 60 giây. Làm tiếp cho đến khi hết dịch. - Bước 8 Dịch rửa low stringency 20 ml từ 5X pha loãng bằng 80 ml ethanol 95 100 xuống còn 1X. - Bước 9 Cho 700 pl dung dịch low stringency vào RNAbc ly tâm 12000 vòng trong 30 giây ở 4oC loại bỏ dịch lọc. 42 - Bước 10 Pha DNase I đang ở dạng bột mịn với 250 gí Tris 10mM pH 7 5 . Hòa tan bằng pipet trộn nhẹ . - Bước 11 Trộn 5 gí DNase I với 75 gí dung dịch DNase delution trong tube 1 5 mí. Cho 80 gí dung dịch DNase vào RNAbc. Ủ ở nhiệt độ phòng trong 15 phút íy tâm 12000 vòng trong 30 giây. Loại bỏ dịch íọc phần dịch bên dưới . - Bước 12 Cho 700 gí dung dịch high stringency vào RNAbc íy tâm 12000 vòng trong
