Phương pháp nhuộm vi khuẩn sống Phương pháp nhuộm Gram do nhà vi khuẩn học Đan Mạch Hans christian Gram (1853 – 1938) phát minh ra từ đầu năm 1884. Nhờ phương pháp này có thể phân biệt vi khuẩn thành hai nhóm lớn: Vi khuẩn Gram dương (Gram – positive) và vi khuẩn Gram âm (Gram – negative) Phương pháp nhuộm Gram được tiến hành như sau: - Cố định tiêu bản vi khuẩn bằng ngọn lửa - Nhuộm thuốc bằng dung dịch tím tinh thể (crystal violet) trong khoảng 1 phút sau đó rửa bằng nước cất. | Thế nào là Vi khuẩn Gram Gram - Phương pháp nhuộm vi khuẩn sống Phương pháp nhuộm Gram do nhà vi khuẩn học Đan Mạch Hans Christian Gram 1853 - 1938 phát minh ra từ đầu năm 1884. Nhờ phương pháp này có thể phân biệt vi khuẩn thành hai nhóm lớn Vi khuẩn Gram dương Gram - positive và vi khuẩn Gram âm Gram - negative Phương pháp nhuộm Gram được tiến hành như sau - Cố định tiêu bản vi khuẩn bằng ngọn lửa - Nhuộm thuốc bằng dung dịch tím tinh thể crystal violet trong khoảng 1 phút sau đó rửa bằng nước cất - Nhuộm tiếp bằng dung dịch Iot dung dịch Lugol trong khoảng 1 phút sau đó rửa lại bằng nước cất - Phủ lên vết bôi dung dịch etanol 95 axeton 1 1 trong khoảng 1 phút sau đó rửa lại bằng nước cất - Nhuộm tiếp bằng thuốc nhuộm màu đỏ như safranin hay Fuchsin Ziehl trong khoảng 30 đến 60 giây sau đó rửa bằng nước cất - Để khô và soi kính Kết quả như sau Nhóm Gram dương có đặc tính không bị dung môi hữu cơ Etanol Axeton tẩy phức chất màu giữa tím kết tinh và Iot. Kết quả là màu tím Nhóm Gram âm bị dung môi hữu cơ tẩy màu thuốc nhuộm ban đầu do đó sẽ bắt màu với thuốc nhuộm bổ sung đỏ vàng với Safranin đỏ tía với Fuchsin . Hai nhóm vi khuẩn Gram dương và Gram âm có các đặc điểm khác nhau cơ bản Trong quá trình nhuộm Gram tế bào trước hết được xử lý với tím tinh thể crystal violet rồi với Iot. Kết quả là có sự tạo thành phức chất tím tinh thể - Iot bên trong tế bào. Khi phủ lên dung môi hữu cơ Etanol Axetol thì vi khuẩn Gram âm bị tẩy lipit của lớp màng ngoài bị tan làm tăng tính thấm của màng dẫn đến sự rửa trôi phức chất tím tinh thể - Iot và làm cho vi khuẩn mất màu. Khi nhuộm bổ sung chúng sẽ bắt màu với thuốc nhuộm này màu đỏ vàng với Safranin đỏ tía với Fuchsin .Đối với nhóm gram dương dung môi hữu cơ Etanol Axetol làm cho các lỗ trong Peptidoglican co lại do đó phức chất tím tinh thể - Iot bị giữ lại trong tế bào. Hình So sánh Gram - A Nhấn vào đây để xem kích thước gốc của ảnh 800x600px . Hình Cấu tạo thành vi khuẩn Gram - Nhấn vào đây để xem kích thước gốc .
