Các protein có hoạt tính sinh học đang ngày càng được sử dụng rộng rãi để làm thuốc như các hormon, đây nguồn nguyên liệu để sản xuất các loại protein này chủ yếu là chiết từ các bộ phận của động vật. Tuy nhiên do nhu cầu ngày càng cao trong khi nguồn cung từ động vật rất hạn chế, giá thành lại đắt nên việc tổng hợp protein được đặt ra một cách cấp thiết. | o TIỂU LUẬN HOÁ SINH Chủ đề Sơ lược về các bước tổng hợp protein có hoạt tính mong muốn Sinh viên Nguyễn Trọng Tuấn Dương Mã SV 0601080 Tổ 3 - Lớp A3K61 o Các protein có hoạt tính sinh học đang ngày càng được sử dụng rộng rãi để làm thuốc như các hormon đây nguồn nguyên liệu để sản xuất các loại protein này chủ yếu là chiết từ các bộ phận của động vật. Tuy nhiên do nhu cầu ngày càng cao trong khi nguồn cung từ động vật rất hạn chế giá thành lại đắt nên việc tổng hợp protein được đặt ra một cách cấp thiết. Trong những thập niên gần đây với những bước tiến lớn trong công nghệ sinh học phân tử việc tổng hợp protein không còn khó khăn như trước nhờ phương pháp tổng hợp sinh học. Mặc dù một số protein có thể tổng hợp bằng con đường hoá học song phương pháp tổng hợp sinh học thể hiện tính tối ưu và thực tiễn cao. Thực tế hiện nay phương pháp này đã được áp dụng rộng rãi không những để tổng hợp một số loại protein làm thuốc như insulin growht còn để tổng hợp rất nhiều hợp chất khác mà nguồn nguyên liệu hạn chế hoặc con đường tổng hợp hoá học gặp khó khăn. Sau đây xin trình bày các bước cơ bản để tổng hợp một protein theo phương pháp tổng hợp sinh học synthetic biology trên tế bào vi khuẩn nhờ plasmid tái tổ hợp. 1. Thiết kế plasmid vector tái tổ hợp Nếu hai loại ADN được xử lý với cùng một enzyme giới hạn restrictase thì mỗi ADN sẽ có đầu dính tương hợp nhau và 2 đoạn ADN ấy sẽ gắn lại được với nhau tạo thành ADN duy nhất. Plasmid tái tổ hợp là plasmid có chứa 2 loại ADN có nguồn gốc khác nhau. Trong quy trình sản xuất protein ta có thể gắn gen bản sao cADN của sinh vật nhân thật bậc cao vào một plasmid từ mô sinh vật chủ chiết lấy pre-m-ARN từ gen mục tiêu rồi loại bỏ các intron và ghép nối các exon ta được m-ARN trưởng thành. Từ m-ARN trưởng thành nhờ enzyme phiên mã ngược tổng hợp cADN bằng kỹ thuật RT-PCR Reverse transcription-polymerase chain reaction và cADN được ghép với plasmid tạo thành plasmid lai. 2 2. Đưa plasmid tái tổ hợp vào tế bào vi
