Trong những năm gần đây thuốc trừ sâu vi sinh Bacillus thuringiensis gọi tắt là (Bt) đã được ứng dụng an toàn và có hiệu quả để thay thế dần các thuốc trừ sâu hoá học. B. thuringiensis là vi khuẩn gram dương, mang các gen cry sinh tổng hợp bào tử và protein tinh thể độc tố có hiệu quả diệt đối với nhiều loài côn trùng thuộc các bộ cánh vảy, cánh cứng và hai cánh. | TẠO DÒNG VÀ XÁC ĐỊNH TRÌNH Tự ĐOẠN ADN ĐẶC HIỆU THUỘC GEN CRY1AB TỪ MỘT SỐ CHỦNG BACILLUS THURINGIENSIS KURSTAKI PHÂN LẬP Ở VIỆT NAM Bùi Thị Hương Nguyễn Thuỳ Châu Bộ môn Vi Sinh Viện Công Nghệ Sau Thu hoạch. Đinh Duy Kháng Phòng Vi Sinh Phân tử Viện Công Nghệ Sinh học Trung Tâm Khoa học Tự nhiên và Công Nghệ Quốc gia. Trong những năm gần đây thuốc trừ sâu vi sinh Bacillus thuringiensis gọi tắt là Bt đã được ứng dụng an toàn và có hiệu quả để thay thế dần các thuốc trừ sâu hoá học. B. thuringiensis là vi khuẩn gram dương mang các gen cry sinh tổng hợp bào tử và protein tinh thể độc tố có hiệu quả diệt đối với nhiều loài côn trùng thuộc các bộ cánh vảy cánh cứng và hai cánh. Các nhà khoa học đã có rất nhiều cố gắng để phân lập vi khuẩn này và thu được nhiều bộ sưu tập các chủng B. thuringiensis rất phong phú. Số các chủng B. thuringiensis phân lập thì nhiều nhưng mỗi chủng chỉ chứa một số nhóm gen cry gây độc với một số loài côn trùng nhất định. Để sàng lọc các chủng B. thuringiensis có chứa gen cry mong muốn tạo dòng và xác định trình tự gen độc tố đó là vấn đề rất cần thiết nó làm cơ sở cho các nghiên cứu đi sâu tiếp theo đối với những gen cry này như nhằm tạo ra các chủng B. thuringiensis tái tổ hợp mới có phổ diệt sâu rộng hoạt lực diệt sâu cao hơn đối với nhiều loài côn trùng quan trọng việc biến nạp các gen độc tố cry thích hợp vào từng loại cây trồng để bảo vệ chúng trước sự tấn công của côn trùng. Chúng tôi đã tiến hành thăm dò sự tồn tại gen crylAb của một số chủng B. thuringiensis var. kurstaki phân lập ở Việt Nam tạo dòng và xác định trình tự đoạn ADN đặc hiệu thuộc gen cry lAb đó và so sánh với trình tự cùng đoạn gen này đã được công bố trong Ngân hàng dữ liệu gen Quốc tế. LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU . Tách chiết ADN tổng số Tiến hành theo phương pháp của Sambrook và Maniatis 10 các chủng B. thuringiensis được lên men lắc trên môi trường LB ở 370C qua đêm. Ly tâm ở phút thu cặn tế bào. Bổ sung 567pl TE 10 1 30pl SDS 10 3pl proteinaza K
