) Khoét một “giếng” nhỏ trong agarose ngay dưới vạch DNA. Bơm dung dịch đệm vào đầy “giếng” và điện trường được tái lập. DNA di chuyển vào “giếng” chứa đầy dung dịch đệm và được thu nhận lại. (iii) Dùng gel agarose đặc biệt như Nusieve hay Seaplaque có điểm nóng chảy rất thấp (650C) cho điện di. Sau điện di, vạch DNA được cắt ra và ủ trong một dung dịch đệm ở nhiệt độ 650C. Khi agarose đã hoàn toàn tan chảy DNA được thu nhận lại sau nhiều công đoạn tách chiết và kết tủa | 20 ii Khoét một giếng nhỏ trong agarose ngay dưới vạch DNA. Bơm dung dịch đệm vào đầy giếng và điện trường được tái lập. DNA di chuyển vào giếng chứa đầy dung dịch đệm và được thu nhận lại. iii Dùng gel agarose đặc biệt như Nusieve hay Seaplaque có điểm nóng chảy rất thấp 650C cho điện di. Sau điện di vạch DNA được cắt ra và ủ trong một dung dịch đệm ở nhiệt độ 650C. Khi agarose đã hoàn toàn tan chảy DNA được thu nhận lại sau nhiều công đoạn tách chiết và kết tủa. 4. Các phương pháp xác định trình tự của nucleic acid Các ph ương pháp phân tích nucleic acid đã nêu đã cung cấp nhiều thông tin về nucleic acid nhưng chưa cho phép kết luận về bản chất của một đoạn nucleic acid cụ thể. Thông tin về sự tương ứng của nucleic acid với gene gì có chức năng điều hòa hay mã hóa cho protein nào chỉ có thể rút ra được từ việc xác định trình tự nucleotide của nucleic acid. Các ph ương pháp xác định trình tự nucleic acid nói chung dựa vào hai nguyên tắc cơ bản được tóm tắt dưới đây về chi tiết có thể tham khảo trong Hồ Huỳnh Thuỳ Dương 1997 Đỗ Quý Hai 2001. - Nguyên tắc hóa học Phương pháp Maxam - Gilbert 1977 dựa vào các phản ứng hóa học thủy phân đặc hiệu phân tử DNA tạo thành một tập hợp nhiều phân đoạn có kích thước khác nhau. - Nguyên tắc enzyme học Phương pháp Sanger 1977 và các phương pháp cải biên Dựa vào sự tổng hợp mạch bổ sung cho trình tự cần xác định nhờ DNA polymerase. Với việc sử dụng thêm dideoxynucleotide nhóm 3 -ON được thay bằng H cùng với các deoxy nucleiotide thông thường kết quả tổng hợp cũng là sự hình thành một tập hợp nhiều đoạn DNA có kích thước khác nhau. Ở cả hai trường hợp các phân đoạn DNA sẽ được phân tách qua điện di trên gel polyacrylamide có khả năng phân tách hai trình tự DNA chỉ chênh nhau một nucleotide. Với việc sử dụng một đoạn nucleotide có đánh dấu đồng vị phóng xạ kết quả trình tự cần xác định dược đọc trên bản phóng xạ tự ghi từ bản điện di. Câu hỏi ôn tập 1. Trình bày tóm tắt lịch sử nghiên cứu các nucleic acid. 21 2. Mô tả các phương .
