Có 3 phương pháp để xác định hàm lượng thimerosal trong vắc xin và sinh phẩm. Tùy theo khả năng hiện có về thiết bị và hóa chất tại cơ sở để chọn 1 trong 3 phương pháp thử nghiệm sau đây: phương pháp đo quang phổ, hóa học và phương pháp vi sinh vật. | XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG THIMEROSAL TRONG VẮC XIN VÀ SINH PHẨM Có 3 phương pháp để xác định hàm lượng thimerosal trong vắc xin và sinh phẩm. Tùy theo khả năng hiện có về thiết bị và hóa chất tại cơ sở để chọn 1 trong 3 phương pháp thử nghiệm sau đây phương pháp đo quang phổ hóa học và phương pháp vi sinh vật. Phương pháp hóa lý Nguyên lý Dựa vào phản ứng giải phóng ion thủy ngân tự do từ thimerosal kết hợp với dithizon thành dithizon-thủy ngân xác định bằng cách so màu. Cách tiến hành Làm song song 2 mẫu mẫu vắc xin thử và mẫu chứng nước cất lấy 0 2 ml mỗi mẫu cho vào từng bình nút mài riêng biệt có dung tích 100 ml. Cho vào mỗi bình 1 2 ml acid sulfuric đậm đặc TT pha loãng 2 lần tính theo thể tích và đun nhẹ bình số 1 chứa mẫu vắc xin thử trong cách thủy cho đến khi tan hết. Thêm vào mối bình 5 ml dung dịch kali permanganat 5 TT lắc đều và để yên trong 1 giờ. Loại bỏ kali permanganat thừa bằng cách thêm 1 5 ml dung dịch hydroxylamin clorid 10 TT thêm 35ml nước cất 2 lần 5 ml dung dịch acid acetic 6M TT và trộn đều. Dùng buret thêm chính xác vào mỗi bình 10 ml dung dịch dithizon 0 001 và lắc 30 giây. Chuyển toàn bộ dung dịch thử của từng bình vào mỗi bình lắng gạn riêng biệt tách lớp cloroform qua một lớp bông đã hấp và sấy khô vào các ống nghiệm. Đo mật độ quang Phụ lục ở bước sóng 580 10 nm kính lọc màu da cam hoặc bước sóng 597 10 nm kính lọc màu đỏ . Hàm lượng thimerosal pg ml có trong vacxin thử được tính theo công thức a x 100 X a x 10 1 0 2 x 49 55 Trong đó a lượng thủy ngân Lig xác định được theo đường chuẩn. 0 2 số ml dung dịch vắc xin thử 49 55 hàm lượng thủy ngân có trong 100 phần của thimerosal Cách dựng đường chuân Cân chính xác 0 5 g thủy ngân hòa vào 15 ml acid nitric đậm đặc TT và thêm nước cất vừa đủ 500 ml được dung dịch thủy ngân có hàm lượng 1 mg ml DD . Xác định hàm lượng thủy ngân như sau Lấy 10 ml DD cho thêm 10 giọt dung dịch phèn sắt amoni 10 và chuẩn độ từ từ với dung dịch amoni sulfocyanid 0 01 N CĐ cho đến khi xuất hiện màu da cam. 1 ml .
