Protein có trong vắc xin và sinh phẩm được xác định theo nhiều phương pháp khác nhau, tùy theo từng loại vắc xin và sinh phẩm. 1. Phương pháp Lowry Nguyên lý Protein có trong mẫu vắc xin thử bị tủa với acid tricloracetic nóng. Xác định lượng tủa để tính ra lượng protein có trong vắc xin, sinh phẩm. Phương pháp tiến hành Pha loãng mẫu thử (nếu cần thiết) để chỉnh hàm lượng protein của mẫu thử trong khoảng 20 - 120 µg/ml. Thêm 1 ml dung dịch acid tricloracetic 10% vào một ống nghiệm có chứa 1 ml mẫu thử | XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG PROTEIN TOÀN PHẦN TRONG VẮC XIN VÀ SINH PHẢM Protein có trong vắc xin và sinh phẩm được xác định theo nhiều phương pháp khác nhau tùy theo từng loại vắc xin và sinh phẩm. 1. Phương pháp Lowry Nguyên lý Protein có trong mẫu vắc xin thử bị tủa với acid tricloracetic nóng. Xác định lượng tủa để tính ra lượng protein có trong vắc xin sinh phẩm. Phương pháp tiến hành Pha loãng mẫu thử nếu cần thiết để chỉnh hàm lượng protein của mẫu thử trong khoảng 20 - 120 pg ml. Thêm 1 ml dung dịch acid tricloracetic 10 vào một ống nghiệm có chứa 1 ml mẫu thử. Đun nóng ở 80OC trong nồi cách thủy trong 15 phút. Làm nguội ở nhiệt độ phòng. Ly tâm ở tốc độ vòng phút trong 30 phút loại bỏ nước nôi. Thêm vào phần lắng cặn 2 ml dung dịch acid tricloracetic 5 . Lắc kỹ trên máy lắc và ly tâm lại một lần nữa ở tốc độ vòng phút trong 30 phút loại bỏ nước nổi. Thêm 2 5 ml dung dịch Alkalin vào mỗi ống nghiệm nêu trên và ủ ở nhiệt độ phòng thời gian ủ tùy từng loại mẫu thử để hòa tan phần lắng cặn. Thêm 2 5 ml nước cất và 0 5 ml thuốc thử Forlin pha loãng 1 2 ủ ở 37 OC trong 30 phút. Ly tâm với tốc độ - vòng phút trong 30 phút với các chế phẩm chứa chất hấp phụ nhôm . Đo mật độ quang học ở bước sóng 750 nm trên quang phổ kế. Song song tiến hành thử nghiệm với mẫu trắng thay vào 1 ml mẫu thử là 1 ml nước cất. Dựng đường chuẩn Dựng đường chuẩn với dung dịch protein chuẩn dung dịch albumin chuẩn ở các nồng độ 25 Lg ml 50 Lg ml 100 Lg ml 150 Lig. ml . Dựa vào hàm lượng protein tìm được trên đường chuẩn tính ra hàm lượng protein có trong mẫu thử. Cách pha dung dịch Alkalin pha ngay trước khi dùng - Dung dịch đồng sulfat pentahydra 2 t hòa tan 2 g đồng sulfat pentahydrat vào vừa đủ 100 ml nước cất. - Dung dịch natri tartrat 4 hòa tan 4 g natri tartrat vào vừa đủ 100 ml nước cất. - Trộn lẫn 2 dung dịch trên được dung dịch A. - Hòa 0 8 g natri hydroxyd và 4 g natri carbonat vào vừa đủ 100 ml nước cất được dung dịch B. - Trộn 50 ml dung dịch B và 1 ml dung dịch
