Nguyên vật liệu - Mẫu thử nghiệm: Nước nổi nuôi tế bào, hỗn dịch virus, vắc xin bán thành phẩm và thành phẩm. - Môi trường nuôi cấy: Môi trường lỏng 1: LM1(pH 7,6-7,8; môi trường có màu đỏ) và môi trường lỏng 2: LM2 (pH 7,2; môi trường có màu vàng cam), dưới dạng 100 ml/chai hoặc 10 ml/ống. | PHÁT HIỆN MYCOPLASMA BẰNG PHƯƠNG PHÁP NUÔI CẤY Nguyên vật liệu - Mẫu thử nghiệm Nước nổi nuôi tế bào hỗn dịch virus vắc xin bán thành phẩm và thành phẩm. - Môi trường nuôi cấy Môi trường lỏng 1 LM1 pH 7 6-7 8 môi trường có màu đỏ và môi trường lỏng 2 LM2 pH 7 2 môi trường có màu vàng cam dưới dạng 100 ml chai hoặc 10 ml ống. - Môi trường rửa lọc Môi trường PPLO lỏng. - Môi trường đặc Môi trường thạch PPLO. - Màng lọc 0 1 um xy lanh 10 ml và dụng cụ cần thiết đủ cho tiến hành thử nghiệm. Các bước tiến hành Chuẩn bị môi trường Pha môi trường LM1 pH 7 6-7 8 500 ml Nước cất pha tiêm 375 ml Môi trường PPLO lỏng 8 g Đỏ phenol 0 4 2 5 ml Hấp ở 121OC 15 phút sau đó thêm 75 ml huyết thanh ngựa 50 ml Yeast Extract 25 6 ml glucose 25 và 1 25 ml Penicilin G. Trộn đều ra chai 100 ml và ống thử 10 ml. Pha môi trường LM2 pH7 0-7 2 500 ml Nước để pha thuốc tiêm 375 ml Môi trường PPLO lỏng 8 g L - Arginin 1 5 g Đỏ phenol 0 4 2 5 ml Hấp ở 121OC 15 phút sau đó thêm 75 ml huyết thanh ngựa 50 ml Yeast Extract 25 và 1 25 ml Penicilin G 1 ml acid hydrocloric. Trộn đều ra chai 100 ml và ống thử 10 ml. Pha môi trường thạch PPLO 500 ml Thạch PPLO 13 5 g Nước để pha thuốc tiêm 375 ml Hấp tại 121OC 15 phút sau đó thêm 75 ml huyết thanh ngựa 50 ml Yeast Extract 25 và 1 25 ml Penicilin G. Trộn đều sau đó đổ thạch ra phiến 6 giếng 8 ml giếng bảo quản 37 OC trước khi thử độ nhạy 1 ngày. Pha môi trường rửa màng lọc Môi trường PPLO lỏng 2 1 g Nước để pha thuốc tiêm 100 ml Hấp ở 121OC 15 phút. Các bước tiến hành - Lọc mẫu sử dụng xy lanh 10 ml hút 6 ml mẫu thử vào giá lọc 0 1 um và bơm mẫu qua lọc cho đến hết. - Rửa lọc sử dụng 30 ml môi trường rửa lọc và xy lanh 10 ml bỏ kim sau đó bơm từ từ cho đến khi môi trường rửa qua hết lọc. - Tháo lọc lấy giấy lọc cho vào đĩa petri vô trùng cắt đôi giấy lọc cho mỗi nửa giấy lọc vào mỗi chai môi trường LM1 và LM2 đã chuẩn bị sẵn. - Chai môi trường sau gây nhiễm được nuôi ở 37 OC 28 ngày. - Cấy truyền trên môi trường lỏng sau gây nhiễm 14 ngày lấy mẫu từ chai
