Xác định hàm lượng Vi polysacarid bằng phương pháp hoá miễn dịch thích hợp, sử dụng polysacharid tinh chế chuẩn làm mẫu chuẩn. Sử dụng phản ứng điện di miễn dịch rocket để xác định hàm lượng Vi polysacharid trong vắc xin thương hàn Vi Phương pháp tiến hành Pha dung dịch đệm và thạch agarose - Pha dung dịch đệm barbital ½. - Rót dung dịch đệm barbital ½. vào bể điện di. - Pha thạch agarose (0,5g thạch agarose hoà vào 40 ml dung dịch đệm bacbital ½), đun cách thuỷ hoặc đun trên máy khuấy từ gia nhiệt. | XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG Vi POLYSACARID CỦA VẮC XIN THƯƠNG HÀN Vi POLYSACHARID Nguyên lý Xác định hàm lượng Vi polysacarid bằng phương pháp hoá miễn dịch thích hợp sử dụng polysacharid tinh chế chuẩn làm mẫu chuẩn. Sử dụng phản ứng điện di miễn dịch rocket để xác định hàm lượng Vi polysacharid trong vắc xin thương hàn Vi Phương pháp tiến hành Pha dung dịch đệm và thạch agarose - Pha dung dịch đệm barbital V. - Rót dung dịch đệm barbital V. vào bể điện di. - Pha thạch agarose 0 5g thạch agarose hoà vào 40 ml dung dịch đệm bacbital V đun cách thuỷ hoặc đun trên máy khuấy từ gia nhiệt cho đến khi thạch tan chảy hoàn toàn. - Để thạch nguội đến khoảng 56oC cho 1 ml huyết thanh thỏ kháng Vi vào và lắc nhẹ tròn đều chai thạch sao cho huyết thanh thỏ kháng Vi hoà tan đều vào thạch nhưng không bị tạo bọt. Tạo bản gel và đục lỗ thạch - Đổ thạch trên khuôn chờ thạch nguội hoàn toàn. - Đục lỗ thạch bằng bộ đục lỗ chuyên dụng sao cho các giếng trên bản gel phải cách mép bản gel ít nhất 2 cm và cách nhau ít nhất 1cm. Số lượng giếng trên bản gel phải được tính toán sao cho có đủ 5 giếng cho các hàm lượng kháng nguyên Vi chuẩn 2 giếng làm kép cho mỗi mẫu thử. Pha mẫu kháng nguyên Vi chuẩn - Pha loãng kháng nguyên Vi chuẩn bằng dung dịch PBS ở các độ pha loãng như sau 100 50 25 12 5 6 25 Lig Vi polysacharid ml. - Lần lượt nhỏ mẫu chuẩn ở các độ pha loãng như trên vào từng giếng trên bản gel 5pl giếng cho vào 2 giếng tiếp theo mỗi giếng 5pl vắc xin mẫu thử. Chạy điện di miễn dịch Rocket - Đặt bản gel vào máy điện di theo hướng mẫu đi từ cực âm sang cực dương. - Bật nguồn cài đặt các thông số thích hợp về hiệu điện thế cường độ dòng điện và thời gian chạy điện di của mẫu. - Dùng giấy lọc Whatman làm cầu nối từ bể dung dịch điện di tới bản gel ở cả 2 đầu bản gel. - Bấm nút Run để chạy điện di Rửa bản gel - Sau khi chạy điện di xong tắt nguồn lấy bản gel ra khỏi máy điện di cho vào hộp nhựa trong có nắp kín. - Cho nước muối sinh lý ngập bản gel và ngâm lắc nhẹ bằng máy lắc trong 3 giờ thay .
