Thí nghiệm xác định hoạt độ Amylaza dựa vào lượng đường khử tạo thành: Sau khi cho enzym thủy tinh bột ở những điều kiện xác định, đun hỗn hợp phản ứng với dung dịch đồng (II), tạo thành kết tủa Cu2O. Hòa tan kết tủa trong thuốc thử arseno- molypden sẽ nhận được nhiều màu xanh da trời. So màu ở bước sóng 660nm, đối chiếu với đồ thị tiêu chuẩn để tính lượng đường. | Thí nghiệm Công nghệ enzym Biên soạn ThS. Trần Xuân Ngạch BÀI 1 XÁC ĐỊNH HOẠT ĐỘ a-AMYLAZA THEO PHƯƠNG PHÁP HEINXEL . Chiết tách dịch enzym từ chế phẩm nấm mốc và từ malt. Cân 20-100 g môi trường nuôi cấy bề mặt chế phẩm nấm mốc hoặc malt nghiền nhỏ cẩn thận cho vào bình tam giác thêm 500-1000 ml dung dịch NaCl 1 đặt trên máy lắc liên tục trong 1-2 h. Lọc hoặc ly tâm ở 6000 vòng phút để được dung dịch enzym trong suốt. . Nguyên tắc Xác định lượng tinh bột bị phân giải dựa trên cơ sở xác định mức độ giảm cường độ màu của hỗn hợp phản ứng với dung dich iốt. Đơn vị hoạt độ ezim là lượng enzym có khả năng phân giải 1mg tinh bột sau 30 phút ở 30 0C. . Cách tiến hành và tính kết quả Cho vào ống nghiệm 1mg dung dịch tinh bột 1 1 mg dung dịch NaCl 0 1 và 2 ml dung dịch đệm phosphat 0 05M pH lắc đều giữ ở 30 0C trong 15-20 phút để dung dịch đạt đến 30 0C. Thêm vào hỗn hợp 1 ml dung dịch enzym đã đạt đến 30 0C. Lắc đều tiếp tục giữ ở 30 0C đúng 30 phút lấy ống nghiệm ra khỏi tủ ấm cho ngay vào 5 ml dung dịch axít sunfosalisilic 20 để làm ngừng phản ứng sau vài phút lọc. Song song với mẫu thí nghiệm làm mẫu kiểm tra cũng tương tự như trên nhưng cho dung dịch axít sunfosalisilic vào trước rồi mới cho dung dịch enzym. Lấy 1ml dịch lọc của mẫu thí nghiệm cũng như mẫu kiểm tra cho vào ống nghiệm thêm 9 ml dung dịch iốt pha loãng 150 lần. So màu ở bước sóng 560 nm. Lấy hiệu số số đọc trên máy giữa mẫu kiểm tra và thí nghiệm đối chiếu với đường cong tiêu chuẩn tính số mg tinh bột đã bị phân giải. Hoá chất sử dụng - Dung dịch NaCl 0 1 - Dung dịch axít sunfosalisilic 20 - Dung dịch iốt hoà tan 1g iốt vào 5ml dung dịch có chứa 2 g KI thêm nước cất vào đến 300ml. Khi dùng pha loãng dung dịch này 150 lần. - Dung dịch đệm phosphat 0 05 M pH 62 Thí nghiệm Công nghệ enzym Biên soạn ThS. Trần Xuân Ngạch - Dung dich tinh bột 1 trong dung dịch đệm phosphat 0 05 M pH . Cân 1g tinh bột trộn với khoảng 10ml dung dịch đệm thêm vào 80ml dung dịch đệm đang sôi để nguội thêm dung
