Phương pháp thực nghiệm dùng để định tên các loài vi khuẩn

1. ĐẶC ĐIỂM HÌNH THÁI:. Nhuộm Gram (phương pháp Hucker cải tiến) Vật liệu, hoá chất: · Dung dịch Tím kết tinh (Crystal violet): 2g tím kết tinh hoà tan trong 20 ml etanol 95% 0,8 g ammon oxalat hoà tan trong 80 ml nước cất Trộn hai dịch nói trên lại với nhau, giữ 48 giờ rồi lọc. Bảo quản trong lọ tối, sử dụng vài tháng. · Dung dịch Iod: Hoà tan 1 g Iod (Iodine) trong 3-5ml nước cất, thêm 2g KI (Kali iodide), khuấy cho tan hết, thêm nước cất cho đủ 300ml. Bảo quản trong. | Phương pháp thực nghiệm dùng để định tên các loài vi khuẩn 1. ĐẶC ĐIỂM HÌNH THÁI . Nhuộm Gram phương pháp Hucker cải tiến Vật liệu hoá chất Dung dịch Tím kết tinh Crystal violet 2g tím kết tinh hoà tan trong 20 ml etanol 95 0 8 g ammon oxalat hoà tan trong 80 ml nước cất Trộn hai dịch nói trên lại với nhau giữ 48 giờ rồi lọc. Bảo quản trong lọ tối sử dụng vài tháng. Dung dịch Iod Hoà tan 1 g lod Iodine trong 3-5ml nước cất thêm 2g KI Kali iodide khuấy cho tan hết thêm nước cất cho đủ 300ml. Bảo quản trong lọ tối. Dung dịch tẩy màu Etanol 95 hoặc trộn hỗn hợp 70ml etanol 95 với 30ml aceton. Dung dịch nhuộm bổ sung Chuẩn bị sẵn dung dịch Safranin O 2 5 trước khi dùng pha với nước cất theo tỷ lệ 1 5 vol vol để có dung dịch 0 5 . Các bước tiến hành Chuẩn bị vết bôi dùng que cấy vô trùng lấy một ít vi khuẩn từ thạch sau khi cấy 24 giờ hoà vào 1 giọt nước cất ở giữa phiến kính làm khô trong không khí. Cố định tế bào hơ nhanh vết bôi trên ngọn lửa đèn cồn 2-3 lần. Nhuộm bằng dung dịch Tím kết tinh trong 1 phút rửa nước thấm khô. Nhuộm lại bằng dung dịch Iod trong 1 phút rửa nước thấm khô. Nhỏ dịch tẩy màu giữ khoảng 30 giây cho đến khi vừa thấy mất màu rửa nước thấm khô. Nhuộm bổ sung bằng dung dịch Safranin trong 2-3 phút rửa nước để khô trong không khí. Soi kính dùng vật kính dầu 100 . Kết quả Vi khuẩn Gram bắt màu tím Gram - bắt màu đỏ. . Nhuộm tiên mao Vật liệu hoá chất Dung dịch A Acid tannic 5 g FeCl3 1 5 g Formalin 2 ml NaOH 1 1 ml Nước cất 100 ml Dung dịch B 2 g AgNO3 hoà tan trong 100 ml nước cất lấy 10 ml dể riêng. Nhỏ dung dịch NH4OH đậm đặc vào 90 ml còn lại thấy hình thành tủa rất đặc tiếp tục nhỏ NH4OH vào cho đến khi tan hết tủa. Lấy 10ml AgNO3 đã bỏ ra ban đầu nhỏ từ từ vào dung dịch thấy xuất hiện váng mỏng tiếp tục nhỏ vào cho đến khi vừa tan hết váng thì thôi. Chuẩn bị phiến kính rửa thật sạch ngâm trong cồn đốt cháy hết cồn rồi mới sử dụng. Các bước tiến hành Hoạt hoá vi khuẩn 2-3 lần trước khi tiến hành nhuộm. Dùng que cấy vô trùng lấy vi khuẩn