Đây là phương pháp cho phép xác định được sự có mặt của những trình tự nucleotide trên một đoạn ADN nào đó, trong hỗn hợp các đoạn ADN khác nhau. Là hiện tượng 2 mạch DNA sau khi đã tách rời, sẽ kết hợp lại với nhau ở điều kiện nhiệt độ được làm giảm từ từ, kết hợp với điều kiện thí nghiệm thích hợp. | Southern blot Sinh học phân tử Thực hiện: Đỗ Đức Anh - Điểm - Thị Hoàng Kim - Hồng Vĩnh Thành - Mai Hoàng Yến Nội dung seminar I II 3 Giới thiệu về phương pháp Southern Blot Lai phân tử III Southern blot 2 1 3 2 1 Khái niệm Các kiểu lai phân tử Các yếu tố ảnh hưởng Nguyên lí và điều kiện Mẫu dò Qui trình Ứng dụng IV I. Giới thiệu chung về phương pháp Southern blot. Đây là phương pháp cho phép xác định được sự có mặt của những trình tự nucleotide trên một đoạn ADN nào đó, trong hỗn hợp các đoạn ADN khác nhau Do đề xuất vào năm 1975, tại đại học Edingburd. Được triển khai nhờ 1 số kĩ thuật nền tảng của công nghệ sinh học phân tử như: Tách chiết gen. PCR Thẩm tích các phân tử acid nucleotide lên màng lai (blot). Lai phân tử ( lai với mẫu dò đặc hiệu) Southern blot II. Lai phân tử Khái niệm Là hiện tượng 2 mạch DNA sau khi đã tách rời, sẽ kết hợp lại với nhau ở điều kiện nhiệt độ được làm giảm từ từ, kết hợp với điều kiện thí nghiệm thích hợp. Đặc điểm: Đặc . | Southern blot Sinh học phân tử Thực hiện: Đỗ Đức Anh - Điểm - Thị Hoàng Kim - Hồng Vĩnh Thành - Mai Hoàng Yến Nội dung seminar I II 3 Giới thiệu về phương pháp Southern Blot Lai phân tử III Southern blot 2 1 3 2 1 Khái niệm Các kiểu lai phân tử Các yếu tố ảnh hưởng Nguyên lí và điều kiện Mẫu dò Qui trình Ứng dụng IV I. Giới thiệu chung về phương pháp Southern blot. Đây là phương pháp cho phép xác định được sự có mặt của những trình tự nucleotide trên một đoạn ADN nào đó, trong hỗn hợp các đoạn ADN khác nhau Do đề xuất vào năm 1975, tại đại học Edingburd. Được triển khai nhờ 1 số kĩ thuật nền tảng của công nghệ sinh học phân tử như: Tách chiết gen. PCR Thẩm tích các phân tử acid nucleotide lên màng lai (blot). Lai phân tử ( lai với mẫu dò đặc hiệu) Southern blot II. Lai phân tử Khái niệm Là hiện tượng 2 mạch DNA sau khi đã tách rời, sẽ kết hợp lại với nhau ở điều kiện nhiệt độ được làm giảm từ từ, kết hợp với điều kiện thí nghiệm thích hợp. Đặc điểm: Đặc hiệu tuyệt đối: sự bắt cặp chỉ xảy ra giữa 2 trình tự hoàn toàn bổ sung cho nhau. Các trình tự bổ sung có thể là DNA hay RNA ptử DNA-DNA, RNA-RNA, các phân tử lai DNA-RNA Các kiểu lai phân tử Lai trên pha rắn Lai trong pha lỏng Lai tại chỗ Southern blot Sự lai phân tử xảy ra do: Chuyển động nhiệt. Nhiệt độ môi trường thấp hơn Tm ít nhất vài độ 1 trình tự bổ sung. 1 trình tự cần biết được gắn trên gía thể Nguyên tắc LAI TRÊN PHA RẮN Màng Nitrocellulose: được sử dụng đầu tiên, nay ít dùng, do: - Độ bền cơ học kém khó thao tác. - Không thể tách rời các phân tử lai trên màng để lai trở lai với một mẫu dò khác. Màng nylon được sử dụng phổ biến: - Có thể tiếp nhận 500µg/cm2. - giữ DNA chắc hơn. Ít đứt gãy Cho phép lai nhiều lần với mẫu dò khác nhau CÁC YẾU TỐ KĨ THUẬT TRONG LAI TRÊN PHA RẮN Diagram Khó khăn: - Định lượng phân tử kém chính xác - Hiệu quả lai thấp (vận tốc lai chậm đi 10 lần so với vận tốc lai trên pha lỏng). Thuận lợi: - Dễ dàng trong thao tác. - Dễ dàng tách trình tự không
