Phản ứng màu Biuret (Biu - rê) là phản ứng dùng để nhận biết sự có mặt của liên kết peptit trong cấu trúc hóa học của hợp chất hữu cơ. Trong thí nghiệm này người ta sử dụng Cu(OH)2 mới sinh trong dung dịch kiềm để tạo phức màu tím. Ngoài ra, có một số biến thể của phản ứng này cũng đã được mở rộng để nhận biết các hợp chất hữu cơ. Người ta cũng sử dụng phản ứng màu Biuret để định lượng protein bằng cách đo mật độ quang (UV-VIS) của dung dịch phức tạo. | Phản ứng màu Biuret ứng màu Biuret Biu - rê là phản ứng dùng để nhận biết sự có mặt của liên kết peptit trong cấu trúc hóa học của hợp chất hữu cơ. Trong thí nghiệm này người ta sử dụng Cu OH 2 mới sinh trong dung dịch kiềm để tạo phức màu tím. Ngoài ra có một số biến thể của phản ứng này cũng đã được mở rộng để nhận biết các hợp chất hữu cơ. Người ta cũng sử dụng phản ứng màu Biuret để định lượng protein bằng cách đo mật độ quang UV-VIS của dung dịch phức tạo thành ở bước sóng 540nm sau đó tính toán dựa trên định luận Beer-Lambert. Mặc dù trong phân tử của protein không có phân tử buiret H2N-CO- 2NH nhưng phép thử vẫn được đặt tên là phản ứng màu Buiret với lý do loại phản ứng này cũng cho phép thử liên kết peptit trong phân tử buiret. Quy trình test định tính. Mẫu thử được xử lý bằng cách thêm một lượng dung dịch base mạnh 1 thường là NaOH hoặc KOH sau đó được thêm một vài giọt dung dịch CuSO4. Nếu dung dịch chuyển sang màu tím thì chứng minh được sự có mặt của protein với nồng độ có thể xác định được là khoảng 5-160mg l . Thuốc thử Buiret Các thuốc thử biuret được làm bằng kali hydroxide KOH đồng II sulfat ngậm nước cùng với tartrat natri kali. Khi thử nếu có mặt Protein thuốc thử chuyển từ màu xanh sang tím. Nếu thuốc thử chuyển từ màu xanh sang màu hồng thì trong dung dịch có sự hiện diện của các chuỗi ngắn polypeptide Không phải tất cả các xét nghiệm biuret cần dùng thuốc thử biuret. Phương pháp thường được sử dụng trong xét nghiệm định lượng protein là phương pháp đo mật độ quang UV-VIS tại bước sóng 540 nm để phát hiện các ion Cu2 . Tăng nhạy cho phép thử Buiret. Cu là một tác nhân làm giảm mạnh tính nhạy của thuốc thử tuy nhiên nó có thể loại trừ bằng phản ứng với với Mo VI trong thuốc thử Folin-Ciocalteu để tạo thành màu xanh molypden. Bằng cách này các protein có thể được phát hiện ở nồng độ từ 0 005 và 2 mg mL 3 . Màu xanh Molypden có thể kết hợp với một số thuốc nhuộm hữu cơ malachite xanh Auramin O có tác dụng khuếch đại tín hiệu trong phép đo quang.
