Mục tiêu nghiên cứu của bài viết nhằm phân lập VK từ mô sinh thiết ổ loét dạ dày tá tràng (DD-TT); nuôi cấy tăng sinh và tách chiết urease từ môi trường nuôi cấy VK làm nguyên liệu chế tạo kháng thể kháng urease. | TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 1-2014 NGHIÊN CỨU PHÂN LÂP VI KHUẨN VÀ TÁCH CHIẾT ENZYM UREASE TỪ MÔI TRƢỜNG NUÔI CẤY HELICOBACTER PYLORI Đỗ Hoàng Long*; Đỗ Minh Trung* Lê Thu Hồng**; Lê Văn Đông* TÓM TẮT Ức chế enzym urease bằng kháng thể đặc hiệu theo đường uống là một hướng nghiên cứu mới trong điều trị nhiễm Helicobacter pylori, nhằm đối phó với tình trạng vi khuẩn (VK) kháng kháng sinh. Nghiên cứu này được tiến hành nhằm phân lập VK từ mô sinh thiết ổ loét dạ dày tá tràng (DD-TT); nuôi cấy tăng sinh và tách chiết urease từ môi trường nuôi cấy VK làm nguyên liệu chế tạo kháng thể kháng urease. Kết quả: đã phân lập được 17 chủng H. pylori từ 18 mẫu bệnh phẩm sinh thiết, đạt tỷ lệ thành công 94,5%. Ba chủng H. pylori có hoạt độ urease cao được chọn và tăng sinh trong môi trường Brucella broth. Tách chiết urease từ dịch nuôi cấy bằng kỹ thuật kết tủa phân đoạn với ammonium sulfate 50% bão hòa. Sản phẩm thu được có hoạt tính urease và tương đối tinh khiết. Kết quả điện di SDS-PAGE trong điều kiện biến tính cho một băng đậm, tương ứng với tiểu đơn vị có trọng lượng phân tử khoảng 60,3 kDa của urease. * Từ khóa: Urease; Helicobacter pylori; Tách chiết enzym. HELICOBACTER PYLORI ISOLATION AND UREASE EXTRACTION FROM CULTURE BROTH SUPERNATANT SUMMARY Urease inhibition with oral specific antibody is a new approach in treatment of Helicobacter pylori infection, coping with antibiotic resistance of this bacterium. This research aims to isolate H. pylori from gastric-peptic ulcer biopsies and extract urease from bacterial culture broth to be used as material for the development of antibody to urease. 17 H. pylori strains were obtained from 18 biopsy samples (). Among them, three strains which showed highest urease activity were then sub-cultured in Brucella broth. Urease was extracted from culture supernatant by precipitation with ammonium sulfate 50% saturation. The obtained product maintained urease activity and relatively pure. SDS-PAGE analysis in denature .
