Bài viết xây dựng quy trình phát hiện nhanh vi khuẩn Salmonella spp. trên nền mẫu thịt bằng kỹ thuật LAMP giúp nhận diện đoạn gen đặc hiệu invA để phát hiện gen gây độc của vi khuẩn Salmonella spp. trên nền mẫu thịt với độ chính xác, độ nhạy, độ đặc hiệu tương đương phương pháp nuôi cấy nhằm mở ra triển vọng về việc tìm kiếm phương pháp nhanh, hiệu quả hơn và tiết kiệm chi phí xét nghiệm các nhóm vi khuẩn này. | Nghiên cứu xây dựng phương pháp phát hiện nhanh vi khuẩn Salmonella spp. trên nền mẫu thịt bằng phương pháp Loop Mediated Isothermal Amplification LAMP TNU Journal of Science and Technology 225 08 472 - 478 NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP PHÁT HIỆN NHANH VI KHUẨN Salmonella spp. TRÊN NỀN MẪU THỊT BẰNG PHƯƠNG PHÁP LOOP MEDIATED ISOTHERMAL AMPLIFICATION LAMP Nguyễn Phạm Trúc Phương Đoàn Thị Quỳnh Hương Trung tâm Nghiên cứu và Phát triển Nông Nghiệp Công Nghệ Cao TÓM TẮT Salmonella là một trong những vi khuẩn gây ra ngộ độc thực phẩm và phân lập ở hầu hết thực phẩm. Mục tiêu của nghiên cứu này là thiết lập được quy trình phát hiện nhanh vi khuẩn Salmonella spp. trên nền mẫu thịt bằng phương pháp Loop Mediated Isothermal Amplification LAMP đặc hiệu với gen invA đáp ứng yêu cầu ứng dụng phân tích. Kết quả nghiên cứu đã xây dựng được quy trình phân tích trực tiếp Salmonella từ mẫu thịt dựa trên phản ứng LAMP bao gồm 1 tăng sinh mẫu 25 g trong môi trường 150 ml dung dịch đệm pepton 75 ml canh thang RVS trong thời gian 10 giờ trên nền mẫu thịt tươi cải tiến phương pháp tách chiết nhanh thu DNA từ dịch tăng sinh mẫu thực phẩm đó là sử dụng đệm NaOH 100 mM gia nhiệt 5 phút tại 95 C siêu âm 30 giây ly tâm vòng phút trong 2 phút thu dịch DNA cho phản ứng LAMP. Kết quả nghiên cứu cho thấy phương pháp được xây dựng có độ đặc hiệu SP đạt 94 độ chính xác AC đạt 94 độ nhạy SE đạt 100 tỷ lệ âm tính giả 0 và tỷ lệ dương tính giả 6 LOD50 là 3 CFU 25g. Hiệu quả phân tích Salmonella bằng phương pháp LAMP được được xây dựng tương đương với phương pháp nuôi cấy theo TCVN 10780-1 2017 ISO 6579-1 2017 trên nền mẫu thịt nhưng có kết quả cho thời gian phân tích ngắn khoảng 10 giờ. Từ khóa Salmonella LAMP gen invA ngộ độc thực phẩm thịt Ngày nhận bài 09 6 2020 Ngày hoàn thiện 31 7 2020 Ngày đăng 31 7 2020 RAPID DETECTION OF Salmonella spp. IN MEAT BY LOOP-MEDIATED ISOTHERMAL AMPLIFICATION LAMP Nguyen Pham Truc Phuong Doan Thi Quynh Huong Research amp Development Center For High .
