Muốn thăm dò, phát hiện và xác định các nhóm chức năng của phân tử enzyme, người ta thường dùng các phương pháp vật lý, hóa học, xác định hằng số ion hóa của các nhóm chức năng và tốt nhất là kết hợp với việc nghiên cứu cấu trúc phân tử của enzyme và của trung tâm hoạt động. | 58 hoạt động của enzyme bởi vì có nhiều nhóm chức năng chỉ làm nhiệm vụ duy trì cấu trúc không gian hoạt động cho phân tử enzyme. Muốn thăm dò phát hiện và xác định các nhóm chức năng của phân tử enzyme người ta thường dùng các phương pháp vật lý hóa học xác định hằng số ion hóa của các nhóm chức năng và tốt nhất là kết hợp với việc nghiên cứu cấu trúc phân tử của enzyme và của trung tâm hoạt động. Các phương pháp vật lý có khả nưng phá huỷ một cách đặc hiệu các nhóm chức năng của enzyme thường không nhiều vì khó có thể chọn được các tác nhân chỉ phá huỷ một số nhóm hóa học nhất định mà lại không làm ảnh hưởng đến toàn bộ cấu trúc của phân tử enzyme. Chính vì vậy thông thường người ta khóa phá huỷ hoặc đánh dấu các nhóm chức năng đó bằng các thuốc thử hóa học như chất ức chế đặc hiệu cơ chất hoặc coenzyme . . Phương pháp dùng chất ức chế Tùy trường hợp có thể dùng các chất ức chế đặc hiệu khác nhau ví dụ - Đối với một số enzyme oxy hóa khử có nhóm hoạt động là ion sắt người ta dùng xyanua cyanide CN để phát hiện vai trò của ion sắt đối với hoạt tính của enzyme vì CN kết hợp với ion sắt làm cho enzyme mất khả năng vận chuyển điện tử. Ví dụ CN ức chế enzyme cytochromoxydase. - Một số enzyme cần có ion kim loại tham gia vào quá trình xúc tác hoặc để giữ ổn định cấu trúc phân tử enzyme. Để thăm dò phát hiện đặc tính cần kim loại của chúng người ta dùng chất kết hợp kim loại như EDTA Ethylen diamino tetraacetate hoặc orthophenantrolin. Nếu là enzyme cần kim loại thì sẽ mất hoạt tính. - Để thăm dò vai trò nhóm - S - CH3 của methionine đối với hoạt tính của enzyme thì oxy hóa nhóm này thành sunfoxit tương ứng - S - CH và enzyme sẽ mất khả năng xúc tác. O - Vai trò của nhóm - SH của Cysteine đối với hoạt động của enzyme được xác định bằng cách cho phản ứng với muối kim loại nặng hoặc dẫn chất của chúng ví dụ PCMB parachloromercuri - benzoate hoặc cho phản ứng với iodoacetate. Dưới tác dụng của các chất đã nêu nhóm SH của enzyme sẽ bị khóa và enzyme mất hoạt động. - Để
