Đang chuẩn bị liên kết để tải về tài liệu:
Luận văn : SỬ DỤNG KỸ THUẬT RFLP XÁC ĐỊNH SỰ ĐA DẠNG DI TRUYỀN CỦA NẤM Metarrhizium anisopliae VÀ NẤM Beauveria bassiana KÝ SINH TRÊN CÔN TRÙNG GÂY HẠI part 3

Không đóng trình duyệt đến khi xuất hiện nút TẢI XUỐNG

Cho vào 800 l ethanol 100% và ủ ở -800C khoảng 30 phút. Thấy DNA kết tủa lơ lửng thành dạng sợi mảnh . Ly tâm bỏ phần dung dịch bên trên.Thu lấy kết tủa chính là DNA. Làm khô DNA bằng cách phơi DNA trong 2h ở nhiệt độ phòng và cho vào TE.1X làm hòa tan DNA, trữ mẫu ở -40C hoặc -200C. Điện di và đọc kết quả. 3.4.5 Quy trình Khuếch đại gen Pr1 của nấm Metarrhizium anisopliae và gen ITS1 – 5.8S – ITS2 của nấm Beaveria Bassiana vuille 3.4.5.1 Nấm Metarrhizium anisopliae Đoạn DNA. | 23 - Cho vào 800pl ethanol 100 và ủ ở -80OC khoảng 30 phút. Thấy DNA kết tủa lơ lửng thành dạng sợi mảnh . - Ly tâm bỏ phần dung dịch bên trên.Thu lấy kết tủa chính là DNA. - Làm khô DNA bằng cách phơi DNA trong 2h ở nhiệt độ phòng và cho vào TE.1X làm hòa tan DNA trữ mẫu ở -40C hoặc -20OC. - Điện di và đọc kết quả. 3.4.5 Quy trình Khuếch đại gen Pr1 của nấm Metarrhizium anisopliae và gen ITS1 - 5.8S - ITS2 của nấm Beaveria Bassiana vuille 3.4.5.1 Nấm Metarrhizium anisopliae Đoạn DNA được khuếch đại theo phương pháp PCR với cặp primer có trình tự cụ thể như sau - METPR1 5 CAC TCT TCT CCC AGC CGT TC 3 - METPR4 5 GTA GCT CAA CTT CCG CAC TC 3 Nguồn Leger St. 1992 Bảng 3.1 Các thành phần trong phản ứng PCR trên nấm Metarrhizium Thành phần Nồng độ cuối Thực hút pl - PCR buffer 1X 2.5pl - MgCl2 1.5mM 0.75pl - dNTP 200mM mỗi dNTP 0.5pl - METPR1 50ng 1.5pl - METPR4 50ng 1.5pl - Tag DNA polymerase 0.04UI 0.5pl - DNA khuôn 125ng 1pl - Nước cất 2 lần vô trùng vừa đủ 25 LI l 24 Bảng 3.2 Quy trình nhiệt khuếch đại gen Pr1 trên nấm Metarrhizium Các bước Nhiệt độ Thời gian - Tách đoạn DNA 940C 5 phút - Số chu kỳ lặp lại 37 chu kỳ - Tách đoạn DNA 940C 1 phút - Ủ bắt cặp 570C 1 phút - Kéo dài 720C 2 phút - Kéo dài 720C 6 phút - Ủ 40C 6 phút 3.4.5.2 Nấm Baeuveria Bassiana vuille Đọan DNA được khuếch đại có trình tự primer cụ thể như sau Primer Trình tự 5 -3 ITS4 TCCTCCGCTTATTGATATGC ITS5 GGAAGTAAAAGTCGTAACAAGG Bảng 3.3 Các thành phần trong phản ứng PCR trên nấm Beauveria Thành phần Nồng độ cuối Thực hút pl - PCR buffer 1X 2.5pl - MgCl2 1.5mM 0.75pl - dNTP 200mM mỗi dNTP 0.5pl - ITS 4 50ng 1pl - ITS 5 50ng 1pl - Tag DNA polymerase 1UI 0.25pl - DNA khuôn 100ng 1pl - Nước cất 2 lần vô trùng vừa đủ 25 U l 25 Bảng 3.4 Quy trình nhiệt khuếch đại vùng ITS1 - 5.8S - ITS2 trên nấm Beauveria Các bước Nhiệt độ Thời gian - Tách đoạn DNA 940C 3 phút - Số chu kỳ lặp lại 30 chu kỳ - Tách đoạn DNA 940C 1 phút - Ủ bắt cặp 560C 30giây - Kéo dài 720C 4 phút - Kéo dài 720C 7 phút - Ủ 40C 10 phút 3.4.6

TÀI LIỆU LIÊN QUAN
Đã phát hiện trình chặn quảng cáo AdBlock
Trang web này phụ thuộc vào doanh thu từ số lần hiển thị quảng cáo để tồn tại. Vui lòng tắt trình chặn quảng cáo của bạn hoặc tạm dừng tính năng chặn quảng cáo cho trang web này.