Đang chuẩn bị liên kết để tải về tài liệu:
ENZYME KINETICS A MODERN APPROACH – PART 5

Một đường cong tiến độ, khảo nghiệm liên tục là cách tốt nhất để xác định kon và Ki của một chất nền khác. Bổ sung một chất ức chế chất nền thay thế cho một kết quả khảo nghiệm enzyme trong một giảm theo cấp số nhân trong tỷ lệ cho một số doanh thu SteadyState cuối cùng của chất nền (hình 13,1). Trong một khảo nghiệm cá nhân, tỷ lệ ức chế (kobs) và tỷ lệ trạng thái ổn định cuối cùng (C) . | NEW METHOD OF DETERMINING pK VALUES OF CATALYTIC GROUPS 85 1.0 -1.0 .I.I I.I I.I. 2 3 4 5 6 7 pH b 2 3 4 5 6 7 pH c Figure 6.4. Variation in the slope of the a log Vmax b log Vmax Ks and c log Ks versus pH plots as a function of pH. 86 pH DEPENDENCE OF ENZYME-CATALYZED REACTIONS Consider the expression for the hydrogen ion dependence of the Ks of an enzyme-catalyzed reaction 1 H K Ke2 H K KY s s s 1 H Kes1 Kes2 H Kes1 H 2 Ke1 H Ke1Ke2 Ke1 H 2 Kes1 H Kes1Kes2 Figure 6.5. a Simulation of log Vmax Ks or log Vmax patterns as a function of the closeness between K1 and K2 values in the enzyme. b Errors between actual and predicted pK values as a function of the difference in pK values of the catalytic groups in the enzyme. NEW METHOD OF DETERMINING pK VALUES OF CATALYTIC GROUPS 87 pH pH b Figure 6.6. a pH dependence of the slope of a log Vmax Ks versus pH data set. b pH dependence of a log Vmax Ks versus pH data set. A logarithmic transformation of Eq. 5.18 results in the expression - log K - log K K - log H 2 Ke1 H KeKe2 Ke1 log H 2 Kes1 H Kes1Kes2 6.19 The first derivative of Eq. 6.19 as a function of log H i.e. pH is d - log KS _ 2 H 2 Ke1 H d pH H 2 Ke1 H Ke1Ke2 2 H 2 Kes1 H - rTT I J Lle t 6.20 H 2 Kes1 H Kes1Kes2 It is not as easy to calculate a value for this derivative at H K since the exact value will depend not only on the relative magnitude of .