Đang chuẩn bị liên kết để tải về tài liệu:
Các phương pháp tách dòng gen Tách dòng gen

Tách dòng gen (gene cloning), còn được gọi với nhiều tên khác nhau: tạo dòng gen, nhân dòng gen, phân lập gen Tách dòng gen là tập hợp các kỹ thuật nhằm đưa một gen, một đoạn DNA cần thiết (DNA ensert) vào tế bào chủ (host cell), tạo điều kiện tích hợp để các tế bào chủ phân chia, tạo nên vô số các tế bào cùng mang một đoạn DNA insert giống nhau, tạo nên một dòng tế bào tái tổ hợp mang gen cần tách dòng | III. Các phương pháp tách dòng gen Tách dòng gen gene cloning còn được gọi với nhiều tên khác nhau tạo dòng gen nhân dòng gen phân lập gen.Tách dòng gen là tập hợp các kỹ thuật nhằm đưa một gen một đoạn DNA cần thiết DNA ensert vào tế bào chủ host cell tạo điều kiện tích hợp để các tế bào chủ phân chia tạo nên vô số các tế bào cùng mang một đoạn DNA insert giống nhau tạo nên một dòng tế bào tái tổ hợp mang gen cần tách dòng. Tách dòng gen có tểh được thực hiện theo nhiều phương pháp khác nhau.Các phương pháp tách dòng gen chủ yếu đuợc sử dụng nhiều trong công nghệ sinh học phân tử là tách dòng thực nghiệm cloning in vitro và tách dòng ảo cloning in silico . 1. Tách dòng invitro. Tách dòng in vitro hay tách dòng thực nghiệm là tách dòng gen được thực hiện từ các mẫu sinh học mô tế vào lông tóc dịch sinh học. mang các gen cần tách dòng hoặc tổng hợp nhân tạo đoạn gen cần tách dòng. Tách dòng in vitro gồm phương pháp khác nhau có thể tách dòng từ DNA tách dòng từ RNA hoặc tách dòng trên cơ sở trình tự cac acid amin trong chuỗi polypeptid. 1.1. Tách dòng gen từ DNA Tách dòn từ DNA gồm các bước cơ bản sau Bước 1 Chuân bị gen cần tách dòng gen cần thiết gen đích - target gene và chọn vectơ tách dòng. - Chuẩn bị gen cần tách dòng Trong các phòng thí nghiệm sinh học phần tử gen cần tách dòng thường được tách chiết từ các mẫu sinh học. Phương pháp này chuẩn bị gen tách dòng bằng tổng hợp nhân tạo từ các oligonucleotid ít được sử dụng do kỹ thuật phức tạp tốn kém và độ chuẩn xác không cao. Trường hợp chưa biết trình tự của gen cần tách dòng phải dựa vào kích thước của gen cần tách dòng để chọn lọc đoạn gen cần tách dòng. Các bước thực hiện chủ yếu tách chiết DNA bộ gen nhân gen bằng PCR sử dụng enzym giới hạn cắt thành các đoạn DNA nhỏ điện di trên gel agar hoặc gel polyacrylamid với thang DNA 1 chuẩn. Từ kết quả điện di dựa vào kích thước của gen cần tách dòng để lựa chọn được đoạn DNA chứa gen cần tách dòng. Sơ đồ kỹ thuật tách dòng thực nghiệm - Chọn vectơ tách dòng Dựa .