Đang chuẩn bị liên kết để tải về tài liệu:
Nghiên cứu ảnh hưởng của các đột biến nằm trong trung tâm hoạt động lên hai hoạt tính Lipase và Gelatinase của Lipase A từ Bacillus subtilis FS2

Trong bài viết này, chúng tôi đã tiến hành tạo các đột biến điểm Ser77 thành Cys (S77C), Asp133 thành Asn (D133N) và His156 thành Asn (H156N). Ảnh hưởng của từng đột biến lên hai hoạt tính lipase và gelatinase được xác định dựa trên sự so sánh các thông số động học của dòng tái tổ hợp và các dòng đột biến. | Tạp chí Công nghệ Sinh học 8(1): 29-36, 2010 NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA CÁC ðỘT BIẾN NẰM TRONG TRUNG TÂM HOẠT ðỘNG LÊN HAI HOẠT TÍNH LIPASE VÀ GELATINASE CỦA LIPASE A TỪ BACILLUS SUBTILIS FS2 Nguyễn Hồng Thanh1, Phùng Thu Nguyệt1, Karl Hult2, Trương Nam Hải1 1 Viện Công nghệ sinh học, Viện Khoa học và Công nghệ Việt Nam Viện Khoa học và Công nghệ Hoàng gia Thụy ðiển (KTH), Stockholm, Thụy ðiển 2 TÓM TẮT Lipase A tái tổ hợp (rLipA) từ Bacillus subtilis FS2 ñược xác ñịnh là có ñồng thời cả hai hoạt tính lipase và gelatinase, trong ñó gelatinase là hoạt tính phụ của enzyme này. Các ñột biến trong trung tâm hoạt ñộng của lipase là S77C, D133N và H156N ñã ñược tạo ra bằng phương pháp Mega-primer. Cả ba dòng ñột biến ñều ñã ñược tách dòng và biểu hiện thành công trong tế bào E. coli BL21 (DE3). Tuy nhiên chỉ có hai dòng ñột biến S77C và H156N ñược tinh sạch còn ñột biến D133N bị biểu hiện dưới dạng không tan. Các thông số ñộng học Km và Vmax ñối với hai hoạt tính lipase và gelatinase của dòng tái tổ hợp ñã ñược xác ñịnh và so sánh với các dòng ñột biến. Hai ñột biến S77C và H156N ñã làm mất hoàn toàn hoạt tính lipase nhưng ñột biến S77C lại làm tăng hoạt tính phụ gelatinase lên khoảng 20 lần. Các ñột biến tại trung tâm hoạt ñộng của lipase ñã làm thay ñổi cấu hình không gian và mạng lưới liên kết hydro dẫn ñến thay ñổi khả năng liên kết giữa enzyme với cơ chất, do vậy lipase có thể dễ dàng kết hợp với cơ chất của gelatinase và thúc ñẩy phản ứng phân cắt liên kết gelatin. Hoạt tính gelatinase của rLipA có thể ñược quyết ñịnh bởi một số các gốc amino acid khác trong trung tâm hoạt ñộng của enzyme này. Từ khóa: Bacillus subtilis, ñột biến ñiểm, gelatinase, hoạt tính phụ, lipase MỞ ðẦU Trong những năm gần ñây, một số enzyme ñã ñược xác ñịnh có khả năng xúc tác nhiều hơn một phản ứng hóa học tùy thuộc vào ñiều kiện phản ứng. ðặc tính này của enzyme ñược gọi là hoạt tính phụ (enzyme promiscuity) (Copley, 2003). Thông thường mỗi enzyme chỉ xúc tác ñặc hiệu với một kiểu tạo .