Đang chuẩn bị liên kết để tải về tài liệu:
Bài giảng môn Sinh học phân tử: Chương 8 - Nguyễn Hữu Trí

Bài giảng Sinh học phân tử: Chương 8 Các kỹ thuật phân tích trong Sinh học phân tử, cung cấp cho người học những kiến thức như: Tách chiết DNA; Phương pháp sắc ký; Các phương pháp định tính và định lượng thô nucleic acid; Điện di trên gel; Điện di trên gel agarose; Điện di trên gel polyacrylamide; Phương pháp định lượng bằng quang phổ kế; .Mời các bạn cùng tham khảo! | Chương 8 Các kỹ thuật phân tích trong Sinh học phân tử 5 18 2020 4 17 PM 1 Nguyễn Hữu Trí nhtri@hcmuaf.edu.vn Tách chiết DNA Để thu nhận DNA tinh sạch cần loại bỏ những thành phần tạp nhiễm mà quan trọng nhất là protein. Sự tách chiết DNA dựa trên nguyên tắc hòa tan khác nhau của các phân tử khác nhau nucleic acid protein trong hai pha không hòa tan phenol chloroform nước . Mục đích là thu được các phân tử nucleic acid ở trạng thái nguyên vẹn tối đa không bị phân hủy bởi các tác nhân cơ học hay hóa học. Các nucleic acid cần được tách chiết trong điều kiện nhiệt độ thấp để ức chế hoạt động của các enzyme nội bào DNase và RNase . Sau công đoạn tách chiết nucleic acid tinh sạch nằm trong một thể tích dung dịch lớn. Sự tủa kết hợp với ly tâm cho phép thu nhận nucleic acid dưới dạng cặn tủa dễ bảo quản và khi cần có thể hòa lại trong nước theo nồng độ mong muốn. 2 Nguyễn Hữu Trí 5 18 2020 4 17 PM nhtri@hcmuaf.edu.vn 1 Tách chiết DNA Bước 1 phá màng tế bào màng nhân Bước 2 loại protein Bước 3 thu hồi nucleic acid 3 Nguyễn Hữu Trí 5 18 2020 4 17 PM nhtri@hcmuaf.edu.vn Tách chiết DNA Phá màng tế bào màng nhân nghiền tế bào mô trong một hỗn hợp chất tẩy SDS và proteinase để phá vỡ màng tế bào màng nhân giải phóng DNA ra môi trường đồng thời phân hủy các protein liên kết với DNA. Chất tẩy là phân tử lưỡng cực sẽ kết hợp với protein màng và các phân tử phospholipid làm phá vỡ cấu trúc màng. Chất tẩy ion hóa có tác dụng phá màng mạnh chất tẩy không ion hóa có tác dụng phá màng nhẹ hơn. Loại protein lắc mẫu trong dung dịch phenol chloroform để biến tính protein đồng thời không hòa tan nucleic acid. Protein bị biến tính không hòa tan trong pha nước có chứa nucleic acid và sau khi li tâm sẽ tủa thành một lớp nằm giữa pha nước và pha phenol chloroform. Thu hồi nucleic acid trong pha nước. Tủa nucleic acid nhằm thu nhận nucleic acid dưới dạng cô đặc để bảo vệ chúng khỏi sự phân hủy của các enzyme và khi cần có thể hòa lại trong nước theo nồng độ mong muốn. Có thể tủa trong ethanol