Đang chuẩn bị liên kết để tải về tài liệu:
Luận văn : Ứng dụng kỹ thuật PCR - RFLP xác định các kiểu gen thụ thể prolactin trên giống heo Yorkshire part 5

Hình 4.5: Kết quả điện di sản phẩm PCR theo qui trình 3 với nồng độ gel 1,5 % 4.2.2 Kết quả thực hiện phản ứng PCR theo hai loại mẫu khác nhau Chúng tôi đã tiến hành thực hiện phản ứng PCR với 2 loại mẫu khác nhau, kết quả thu đƣợc nhƣ Bảng 4.5 sau: Bảng 4.5: So sánh tỉ lệ thành công của phản ứng PCR với hai loại mẫu khác nhau Loại mẫu Máu Da tai Số mẫu thực hiện 10 10 Số mẫu thành công 3 7 Tỉ lệ thành công (%) 30 70 . | 37 Các băng phụ chuỗi ngắn Hình 4.5 Kết quả điện di sản phẩm PCR theo qui trình 3 với nồng độ gel 1 5 4.2.2 Kết quả thực hiện phản ứng PCR theo hai loại mẫu khác nhau Chúng tôi đã tiến hành thực hiện phản ứng PCR với 2 loại mẫu khác nhau kết quả thu đuợc nhu Bảng 4.5 sau Bảng 4.5 So sánh tỉ lệ thành công của phản ứng PCR với hai loại mẫu khác nhau Loại mẫu Số mẫu thực hiện Số mẫu thành công Tỉ lệ thành công Máu 10 3 30 Da tai 10 7 70 Mẫu máu có tỉ lệ thành công thấp hơn mẫu da tai. Các loại protein của máu chủ yếu là các phân tử hemoglobin có chứa nhóm heme Nguyễn Phuớc Nhuận 2003 . Theo Erlich nhóm này ức chế mạnh đến hoạt động của Taq polymerase trích dẫn bởi Lê Thị Thu Phuơng 2003 . Do Taq polymerase bị ức chế nên phản ứng PCR có hiệu quả thấp trong việc xác định gen PRLR. 38 1000 bp 400 bp 390 bp Hình 4.6 Kích thước của sản phẩm PCR Ghi chú 1 2 3 sản phẩm PCR được thực hiện bởi cặp primer của A.L Vincent LD ladder 100 bp 4.3 Kết quả thực hiện cắt enzyme giới hạn trên các nồng độ khác nhau Việc xử lý enzyme là một trong những công đoạn quan trọng trong việc xác định tần số xuất hiện của các kiểu gen thụ thể prolactin. Đây là công đoạn rất tốn kém đòi hỏi chi phí cao khi thao tác trên số lượng mẫu lớn. Do đó việc xác định nồng độ thể tích của các enzyme tham gia vào quá trình phân cắt sao cho hiệu quả nhất và kinh tế nhất là rất cần thiết. Kết quả của việc cắt enzyme theo các qui trình khác nhau được trình bày ở bảng 4.6 dưới đây Bảng 4.6 So sánh tỉ lệ thành công giữa các nồng độ cắt enzyme khác nhau Nồng độ Số mẫu thực hiện Số mẫu thành công Tỉ lệ thành công 1 10 0 0 2 10 10 100 3 10 10 100 Xử lý enzyme theo qui trình của nhà sản xuất không thành công. Sản phẩm sau khi xử lý enzyme không thấy sự phân cắt của enzyme. Đây là qui trình chuẩn yêu cầu 39 lượng DNA của mẫu đưa vào tương đối chính xác lượng enzyme sử dụng tương đối cao. Sản phẩm PCR của chúng ta sau khi thu được thể tích khoảng 25 pl nồng độ rất khó định lượng không thể đạt đến mức 1000 ng pl . Như vậy