Đang chuẩn bị liên kết để tải về tài liệu:
Một số vấn đề của sinh học phân tử part 5

Do tính chất thoái hoá của mã di truyền nên chúng ta không nhận được trình tự nucleotide chính xác. Điều này không ảnh hưởng nhiều tới kết quả sàng lọc do phép lai chỉ đòi hỏi độ tương đồng nhất định giữa đầu dò và ADN cần tìm. Hình 3.9: Sàng lọc quần lạc mang dòng cần tìm từ ngân hàng. Màng chứa các quần lạc được gọi là các replica. Chúng được xử lý với kiềm và nhiệt độ trước khi lai với đầu dò gắn phóng xạ hoặc phát huỳnh quang. Sau khi lai, vị trí quần. | 77 thể được tổng hợp nhân tạo dựa vào trình tự acid amin của protein. Do tính chất thoái hoá của mã di truyền nên chúng ta không nhận được trình tự nucleotide chính xác. Điều này không ảnh hưởng nhiều tới kết quả sàng lọc do phép lai chỉ đòi hỏi độ tương đồng nhất định giữa đầu dò và ADN cần tìm. Hình 3.9 Sàng lọc quần lạc mang dòng cần tìm từ ngân hàng. Màng chứa các quần lạc được gọi là các replica. Chúng được xử lý với kiềm và nhiệt độ trước khi lai với đầu dò gắn phóng xạ hoặc phát huỳnh quang. Sau khi lai vị trí quần lạc lai với đầu dò được phát hiện trên phim tự ghi phóng xạ hoặc dựa vào tín hiệu phát màu. Phương pháp phổ biến được áp dụng trước đây để sàng lọc screening một dòng từ ngân hàng được mô tả trên hình 3.9. Số lượng N tế bào vi khuẩn mang plasmid hoặc các phage mang vector X hay cosmid của ngân hàng được nuôi cấy trên các đĩa petri mọc thành các quần lạc. Đặt lên trên bề mặt mỗi đĩa một màng sao cho các quần lạc được chuyển từ đĩa sang màng thường là màng nilon có ái lực liên kết cao với ADN . Xử lý màng với kiềm để phá vỡ tế bào gây biến tính ADN và cố định chúng trên màng. Sau đó các màng được ủ với đầu dò đặc hiệu. Đầu dò này được đánh dấu phóng xạ hoặc hoá học. Đầu dò sẽ lai với ADN có trình tự bổ sung với chính nó. Vị trí của quần lạc mang dòng lai sẽ được phát hiện và được tách ra khỏi các quần lạc khác. Sử dụng đầu dò đánh dấu phóng xạ cho phép xác định nhanh nhạy chính xác dòng mong muốn trong số hàng triệu dòng. Quá trình này thường được lặp lại 3 lần với các điều kiện lai thay đổi để tăng khả năng sàng lọc loại trừ các dòng lai nhiễu do đầu dò có khả năng lai với cả các đoạn ADN có trình tự tương đồng với đầu dò. Ngoài ra nếu kháng thể đã biết có thể sử dụng kỹ thuật miễn dịch để sàng lọc gen ADNc mã cho kháng nguyên. Lúc đó cần sử dụng ngân hàng ADNc chứa các vector biểu hiện gen expression vector . Kháng nguyên được tổng hợp từ dòng mang ADNc mã cho kháng nguyên đó. Kháng thể được đánh dấu bằng phóng xạ hoặc hóa học làm đầu dò. Đầu dò .