Đang chuẩn bị liên kết để tải về tài liệu:
Biểu hiện và tinh sạch amidase aliphatic từ Rhodococcus erythropolis PR4

Để phục vụ mục đích nghiên cứu mức độ biểu hiện trong vi khuẩn E. coli BL21 DE3 của gen mã hóa amidase khuếch đại từ DNA hệ gen của vi khuẩn Rhodococcus erythropolis PR4, chúng tôi đã tiến hành biểu hiện và tinh sạch amidase tái tổ hợp trong vi khuẩn E. coli chủng BL21 DE3. Protein - enzyme amidase ở vi khuẩn này được mã hóa nhờ đoạn gen có kích thước 1038 bp đã được giải trình tự và công bố trên ngân hàng gen với số hiệu ACNO01000111. | Nguyễn Hà Thu và Đtg Tạp chí KHOA HỌC & CÔNG NGHỆ 184(08): 35 - 40 BIỂU HIỆN VÀ TINH SẠCH AMIDASE ALIPHATIC TỪ Rhodococcus erythropolis PR4 Nguyễn Hà Thu1*, Nguyễn Xuân Vũ1, Phạm Bằng Phương1,2 1 Trường Đại học Nông Lâm – ĐH Thái Nguyên 2 Viện Khoa học Sự sống – ĐH Thái Nguyên TÓM TẮT Để phục vụ mục đích nghiên cứu mức độ biểu hiện trong vi khuẩn E. coli BL21 DE3 của gen mã hóa amidase khuếch đại từ DNA hệ gen của vi khuẩn Rhodococcus erythropolis PR4, chúng tôi đã tiến hành biểu hiện và tinh sạch amidase tái tổ hợp trong vi khuẩn E. coli chủng BL21 DE3. Protein - enzyme amidase ở vi khuẩn này được mã hóa nhờ đoạn gen có kích thước 1038 bp đã được giải trình tự và công bố trên ngân hàng gen với số hiệu ACNO01000111. Sau khi thiết kế mồi và khuếch đại thành công đoạn gen, chúng tôi tiến hành tách dòng trên E. coli DH5α và biểu hiện trên E. coli BL21 DE3 thông qua 2 loại vector tương ứng là pGEM-T và pET28a. Enzyme amidase có kích thước xấp xỉ 38 kDa được biểu hiện tối ưu ở điều kiện nuôi cấy 37 oC, nồng độ chất cảm ứng IPTG 1 mM trong thời gian 4 h. Sử dụng cột sắc ký trao đổi ion Macro-Prep High Q (BIO-RAD) và cột superdexTM 200 10/300 (GE Healthcare), chúng tôi đã tinh sạch được amidase tái tổ hợp từ dịch chiết tế bào. Từ khóa: Amidase; Escherichia coli; Acrylamide; Enzyme tái tổ hợp; Vector biểu hiện MỞ ĐẦU* Amidase (EC 3.5.1.4) được tìm thấy bởi Mohamed S. và cộng sự vào năm 1994, có kích thước xấp xỉ 44,5 kDa (xác định bằng SDS-PAGE) và điểm đẳng điện được ước tính là pH 4.0. Trình tự aa N-terminal của enzyme này được công bố như sau: M R H G D I T S S P D T V G V A V [7]. Amidase được biết đến là enzyme xúc tác quá trình thủy phân amit giải phóng các axit và amoniac tương ứng [6]. Enzyme này có thể được phân thành hai loại theo đặc tính bề mặt của chúng [2], loại thứ nhất bao gồm các amidase chỉ làm thuỷ phân các amit mạch ngắn, loại thứ hai là các amidase thủy phân chuỗi amit mạch trung bình, acrylamide và heterocyclicamide như isobutyramide .