Đang chuẩn bị liên kết để tải về tài liệu:
Hộp Điện Trong Công Nghệ DNA part 21

Tham khảo tài liệu 'hộp điện trong công nghệ dna part 21', kỹ thuật - công nghệ, điện - điện tử phục vụ nhu cầu học tập, nghiên cứu và làm việc hiệu quả | Hình 4.6. Tạo dòng theo phương thức khử hoạt tính bằng chèn đoạn. Amp r gen kháng ampicillin lacZ gen mã hóa enzyme p -galactosidase. Hình 4.7. Tạo dòng định hướng. Tet r gen kháng tetracycline Tets gen kháng tetracycline bị khuyết đoạn và mất hoạt tính. 2.3. Biến nạp vector tái tổ hợp vào vi khuẩn tế bào vật chủ Sau khi tạo được vector tái tổ hợp mang gen ngoại lai việc tiếp theo là biến nạp nó vào tế bào vật chủ. Trong trường hợp này tế bào vật chủ thường được sử dụng là vi khuẩn E. coli để khuếch đại một lượng lớn DNA plasmid tái tổ hợp dùng cho các phân tích về sau. Hai phương pháp được dùng để biến nạp vector tái tổ hợp vào E. coli là điện biến nạp electroporation transformantion và hóa biến nạp chemical transformation . 2.3.1. Điện biến nạp Đây là kỹ thuật hiệu quả nhất để biến nạp vi khuẩn. Hai thông số quan trọng của phương thức này là loại tế bào vi khuẩn và tần số xung điện cần thiết. Thể tích của dung dịch tế bào thường được dùng là 30 Lil. tương ứng với nồng độ 1010 tế bào E. coli mL có bổ sung 5 ng plasmid trong một cuvette có khoảng trống điện cực electrode gap 0 1 cm. Hiệu suất biến nạp của phương thức này lớn hơn 1 109 thể biến nạp pg plasmid siêu xoắn và khoảng 1 108 thể biến nạp pg plasmid được dùng trong phản ứng gắn. Tần số biến nạp khoảng 0 02 cho cả hai loại plasmid. Tần số biến nạp thấp đã ngăn cản được sự đồng biến nạp co-transformation vào vi khuẩn của hai hoặc nhiều phân tử plasmid. Phương pháp điện biến nạp có một số ưu điểm sau - Hiệu suất biến nạp cao. - Có thể dùng một thể tích dịch tế bào nhỏ. Thể tích dịch tế bào khoảng 20 Lil. có thể cho hiệu suất khoảng 109 thể biến nạp. - Phương pháp chuẩn bị tế bào biến nạp rất đơn giản không sử dụng các kỹ thuật phức tạp và tốn thời gian. Hơn nữa các tế bào dùng để biến nạp có thể được chuẩn bị trước và bảo quản vô hạn định mà không mất tính khả biến. - Tần số điện biến nạp với DNA siêu xoắn và DNA mạch vòng là giống nhau. Do đó không cần thiết phải dùng vector được tinh sạch cao trong các phản