Đang chuẩn bị liên kết để tải về tài liệu:
Hộp Điện Trong Công Nghệ DNA part 25

Tham khảo tài liệu 'hộp điện trong công nghệ dna part 25', kỹ thuật - công nghệ, điện - điện tử phục vụ nhu cầu học tập, nghiên cứu và làm việc hiệu quả | Chương 5 Tạo dòng genomic DNA của eukaryote và xây dựng thư viện genomic DNA Thư viện genomic DNA là một tập hợp các đoạn DNA cùng đại diện cho một genome nguyên vẹn hoặc gần nguyên vẹn của cá thể mà DNA được bắt nguồn từ đó. Các đoạn này nằm trong các vector tự sao chép cho phép chúng được duy trì và sinh sản cùng với tế bào của cơ thể vi sinh vật như vi khuẩn Escherichia coli hoặc nấm men Saccharomyces cerevisiae. Những thư viện như thế có thể bảo quản như là một nguồn cố định của các đoạn DNA đại diện cho một cơ thể đặc biệt. Một phòng thí nghiệm này có thể thu thập thư viện genome từ một phòng thí nghiệm khác hoặc từ một nguồn thương mại như là một cách lựa chọn để xây dựng thư viện riêng của mình. Một khi thu được các thư viện được dùng chủ yếu hoặc để sàng lọc theo các phương pháp khác nhau nhằm phân lập một các trình tự nucleotide quan tâm đặc biệt hoặc để xác định vị trí và thứ tự của các trình tự trong genome mà từ đó thư viện được xây dựng physical mapping . Xây dựng một thư viện genomic DNA bao gồm bốn giai đoạn chính Hình 5.1 Cắt DNA gắn DNA vào vector đóng gói các dòng tái tổ hợp trong vỏ protein của virus để làm bước trung gian trước khi xâm nhiễm vào tế bào vật chủ và chuyển cấu trúc đó vào tế bào vật chủ. I. Cắt genomic DNA bằng các enzyme hạn chế Để đưa toàn bộ các gen của genome vào một thư viện trước hết genome phải được cắt bởi enzyme hạn chế thành các đoạn DNA có kích thước thích hợp tùy thuộc vào loại vector nhận chúng. Genomic DNA thường được cắt bằng enzyme hạn chế có trình tự nhận biết 4 bp ví dụ như MboI nhận biết trình tự 5 -GATC-3 . Tuy nhiên không phải dễ dàng thu được một gen nguyên vẹn nằm trên một đoạn DNA. Trong thực tế một gen thường bị cắt thành nhiều đoạn DNA do vị trí nhận biết của enzyme nằm ngay trong gen. Hình 5.1. Xây dựng thư viện genomic DNA. Các giai đoạn trong xây dựng thư viện DNA trong vector bacteriophage l . a b c và d trình bày sự khác nhau nhưng chồng lên nhau của các đoạn DNA trong genome được hợp nhất trong các .