Đang chuẩn bị liên kết để tải về tài liệu:
Giáo trình CÔNG NGHỆ DNA TÁI TỔ HỢP - Chương 7

Chương 7 gen tái tổ hợp trong Escherichia coli V Escherichia coli E. coli hoặc tăng hiệu s . Mặc dù E. coli không phải là một vật chủ lý tưởng để biểu hiện các gen của eukaryote do chúng không có khả năng sửa đổi hậu dịch mã (post-translation modification) cho các chuỗi polypeptide của các protein có cấu trúc phức tạp. Tuy nhiên, trong một số trường hợp người ta vẫn có thể sử dụng vi khuẩn E. coli cho những protein có cấu trúc đơn giản hơn. Đối với những protein có cấu trúc phức tạp, vật chủ thường. | Chương 7 Biểu hiện gen tái tổ hợp trong Escherichia coli Vector biểu hiện là vector có thể mang các gen ngoại lai mong muốn cho phép thực hiện sự phiên mã của các bản sao được tạo dòng và sự dịch mã các mRNA của chúng trong Escherichia coli. Những vector như thế được dùng để biểu hiện các gen của eukaryote trong E. coli hoặc tăng hiệu suất các sản phẩm của gen ở prokaryote. Mặc dù E. coli không phải là một vật chủ lý tưởng để biểu hiện các gen của eukaryote do chúng không có khả năng sửa đổi hậu dịch mã post-translation modification cho các chuỗi polypeptide của các protein có cấu trúc phức tạp. Tuy nhiên trong một số trường hợp người ta vẫn có thể sử dụng vi khuẩn E. coli cho những protein có cấu trúc đơn giản hơn. Đối với những protein có cấu trúc phức tạp vật chủ thường được sử dụng là các cơ thể eukaryote ví dụ nấm men Saccharomyces cerevisiae nấm mốc Aspergillus niger. do chúng có thể hậu dịch mã được. Để biểu hiện tất cả các gen ngoại lai trong E. coli phải bắt đầu bằng việc gắn đoạn gen ngoại lai vào trong vector biểu hiện thường là plasmid . Vector này phải có đủ các cấu trúc cần thiết sau - Trình tự khởi đầu sao chép ori để có thể tạo ra nhiều bản sao trong tế bào vật chủ. - Các trình tự mã hóa gen chỉ thị chọn lọc selectable marker để đảm bảo duy trì vector trong tế bào. - Một promoter kiểm soát phiên mã ví dụ lac trp hoặc tac cho phép sản xuất một lượng lớn mRNA từ các gen được tạo dòng. - Các trình tự kiểm soát dịch mã như trình tự liên kết ribosome được bố trí thích hợp và codon khởi đầu AUG. - Một polylinker để đưa gen ngoại lai vào trong một hướng chính xác với promoter. Chỉ khi được cấu trúc đầy đủ như thế các vector biểu hiện mang gen ngoại lai mới được biến nạp vào chủng E. coli thích hợp. Công nghệ DNA tái tổ hợp 155 ShihhocQBU.Com SinhhocQBU.Net Sinhhoc.tk Chương này mô tả các phương pháp và các plasmid vector được sử dụng để sản xuất các protein dung hợp fusion protein và các protein nguyên thể native protein trong vi khuẩn. Các protein dung .