Đang chuẩn bị liên kết để tải về tài liệu:
Thí nghiệm vi sinh vật học - BÀI 9 : PHƯƠNG PHÁP THU NHẬN VÀ XÁC ĐỊNH HOẠT TÍNH ENZYM TỪ VI SINH VẬT

THU NHẬN CHẾ PHẨM ENZYM VI SINH VẬT THÔ TỪ PHƯƠNG PHÁP NUÔI CẤY BỀ MẶT 1.1. Nguyên tắc Trong quá trình phát triển của vi sinh vật, enzym luôn luôn được tổng hợp để tham gia vào quá trình đồng hoá và quá trình dị hoá. Dưới đây là phần thực nghiệm được tiến hành để thu nhận chế phẩm enzym thô. 1.2. Nguyên liệu và hoá chất 1. Giống vi sinh vật được dùng trong thí nghiệm là nấm sợi Aspergillus oryzae. Nấm sợi này có thể sinh tổng hợp enzym amylase, protease và cả cellulase. | Thí nghiệm vi sinh vật học ThS.Lê Xuân Phương BÀI 9 PHƯƠNG PHÁP THU NHẬN VÀ XÁC ĐỊNH HOẠT TÍNH ENZYM TỪ VI SINH VẬT I. THU NHẬN CHẾ PHẨM ENZYM VI SINH VẬT THÔ TỪ PHƯƠNG PHÁP NUÔI CẤY BỀ MẶT 1.1. Nguyên tắc Trong quá trình phát triển của vi sinh vật enzym luôn luôn được tổng hợp để tham gia vào quá trình đồng hoá và quá trình dị hoá. Dưới đây là phần thực nghiệm được tiến hành để thu nhận chế phẩm enzym thô. 1.2. Nguyên liệu và hoá chất 1. Giống vi sinh vật được dùng trong thí nghiệm là nấm sợi Aspergillus oryzae. Nấm sợi này có thể sinh tổng hợp enzym amylase protease và cả cellulase tuỳ theo cơ chất cảm ứng mà ta đưa vào. 2. Môi trường bán rắn cơ bản gồm - Cám 70 - Trấu 25 - Các nguyên liệu chứa cơ chất cảm ứng để tổng hợp ra enzym tương ứng 5 - Độ ẩm môi trường là 60 - 65 3. Thiết bị tiệt trùng 4. Các dụng cụ thuỷ tinh dùng trong nuôi cấy gồm đĩa Petri bình tam giác 250 ml bình tam giác 1000 ml. 5. Khay hoặc các dụng cụ đan bằng tre. 6. Tủ ấm 1.3. Cách tiến hành 1. Chuẩn bị 50g môi trường cơ bản trên trong mỗi bình tam giác có dung tích 250 ml hoặc 10g môi trường trên vào các hộp Petri. Nếu cần có hàm lượng protease cao cho thêm 5 bột đậu nành nếu cần có hàm lượng pectinase cao cho thêm 5 bột cà rốt . để làm cơ chất cảm ứng. 2. Dùng nước máy tạo ra độ ẩm môi truờng từ 60 - 65 đem tiệt trùng ở 1210C trong 30 phút. 3. Chuẩn bị 3 - 5 ống nghiệm nước vô khuẩn. 79 Thí nghiệm vi sinh vật học ThS.Lê Xuân Phương 4. Bằng thao tác vô trùng thực hiện trong tủ cấy vô trùng đổ 10ml nước vô trùng này vào các ống nghiệm giống. 5. Dùng đũa thuỷ tinh vô khuẩn khuấy nhẹ để bào tử nấm sợi Aspểgilles hoà đều trong nước. 6. Dùng pipet vô khuẩn hút lấy 2 ml cho vào đĩa Petri có chứa môi trường đã được vô khuẩn và để nguội hoặc đổ toàn bộ 10 ml nước đã hoà đều bào tử vào bình tam giác có môi trường đã thanh trùng và làm nguội. 7. Lắc đều để môi trường trong bình tam giác trộn đều với bào tử hoặc xoay đều để môi trường trong đĩa Petri trộn đều với bào tử. 8. Bao gói đĩa Petri hoặc đậy .