Trong nghiên cứu này, gen eg9 (không chứa trình tự mã hóa tín hiệu tiết) đã được tối ưu mã bộ ba cho biểu hiện gen ở E. coli, sau đó được đặt tổng hợp nhân tạo và chuyển vào vector pET22b(+) để tiến hành biểu hiện gen trong các chủng E. coli. Qua khảo sát 5 chủng E. coli biểu hiện bao gồm Rosetta, JM109, Origami, SoluBL21, C43, EG9 biểu hiện tốt nhất trong chủng Rosetta và C43. | Tạp chí Công nghệ Sinh học 19 4 645-650 2021 NGHIÊN CỨU BIỂU HIỆN GEN eg9 MÃ HÓA ENDOGLUCANASE GH8 CÓ NGUỒN GỐC TỪ DỮ LIỆU GIẢI TRÌNH TỰ DNA ĐA HỆ GEN CỦA VI KHUẨN TRONG MÙN XUNG QUANH NẤM MỤC TRẮNG THỦY PHÂN GỖ TRONG TẾ BÀO ESCHERICHIA COLI Đỗ Thị Huyền1 2 Lê Thu Hoài1 3 Nguyễn Hải Đăng1 Nguyễn Thị Quý1 Trương Nam Hải1 2 1 Viện Công nghệ sinh học Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam 2 Học viện Khoa học và Công nghệ Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam 3 Học viện Nông nghiệp Việt Nam Người chịu trách nhiệm liên lạc. E-mail tnhai@ Ngày nhận bài Ngày nhận đăng TÓM TẮT Endoglucanase là một loại enzyme quan trọng tham gia vào quá trình thủy phân cellulose và có thể được sử dụng trong nhiều lĩnh vực công nghiệp. Gen mã số GL0183420 gọi tắt là eg9 có kích thước 1398 bp được khai thác từ dữ liệu giải trình tự DNA metagenome của vi khuẩn trong mùn xung quanh khu nấm mục trắng thủy phân gỗ mã hóa cho endoglucanase họ GH8. Đầu 5 của gen có 126 nucleotide tận cùng mã hóa cho tín hiệu tiết ở vi khuẩn gram âm và 1269 nucleotide tiếp theo mã hóa endoglucanase GH8. Trong nghiên cứu này gen eg9 không chứa trình tự mã hóa tín hiệu tiết đã được tối ưu mã bộ ba cho biểu hiện gen ở E. coli sau đó được đặt tổng hợp nhân tạo và chuyển vào vector pET22b để tiến hành biểu hiện gen trong các chủng E. coli. Qua khảo sát 5 chủng E. coli biểu hiện bao gồm Rosetta JM109 Origami SoluBL21 C43 EG9 biểu hiện tốt nhất trong chủng Rosetta và C43. Tuy nhiên ở nhiệt độ nuôi cấy 30oC trong môi trường LB hầu hết EG9 được biểu hiện ở pha không tan trong đó Rosetta là chủng có khả năng biểu hiện EG9 tốt nhất. Enzyme EG9 có thể được biểu hiện tốt trong chủng Rosetta ở các thời điểm cảm ứng khi OD600 của tế bào dao động từ 0 2 đến 1. Sau khi giảm nhiệt độ nuôi cấy xuống 25oC 50 EG9 đã được biểu hiện ở pha tan và có hoạt tính thủy phân tốt cơ chất CMC tạo vòng trong trên đĩa thạch trong đó môi trường PE là môi trường thích hợp nhất cho chủng Rosetta tái tổ .
